在水產(chǎn)養(yǎng)殖體系中,氨氮濃度會(huì)隨時(shí)間的延長而快速增加,現(xiàn)已成為蟹類健康養(yǎng)殖中一個(gè)主要的生理挑戰(zhàn)。本文通過運(yùn)用DGE技術(shù)構(gòu)建和分析了三疣梭子蟹在氨氮脅迫下的鰓基因表達(dá)譜,檢測了氨氮代謝終產(chǎn)物排出相關(guān)的通道蛋白基因表達(dá)水平、尿素和尿酸合成相關(guān)的酶基因表達(dá)水平,測定了各組織中氨氮代謝終產(chǎn)物含量的變化,深入探討了三疣梭子蟹在氨氮脅迫下的生理適應(yīng)機(jī)制、解毒代謝機(jī)制和代謝產(chǎn)物的排出機(jī)制。本論文主要內(nèi)容包括以下三個(gè)方面：1應(yīng)用DGE技術(shù)構(gòu)建與分析三疣梭子蟹在氨氮脅迫下鰓基因表達(dá)譜本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用數(shù)字基因表達(dá)譜(DGE)技術(shù)構(gòu)建了三疣梭子蟹在5mg/L NH4Cl脅迫48h下的鰓基因表達(dá)譜。共產(chǎn)生58,336條unigenes,平均長度為689bp。差異基因功能分類表明在氨氮脅迫下被顯著調(diào)節(jié)的生理過程主要有氨基酸代謝、核苷酸代謝、線粒體膜電位調(diào)節(jié)、活性氧代謝、抗氧化及免疫響應(yīng)。本文選擇了分別對(duì)與抗氧化系統(tǒng)、線粒體電子傳遞、蛋白質(zhì)消化與吸收、免疫系統(tǒng)相關(guān)的7個(gè)基因進(jìn)行了實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證。本研究結(jié)果為更好的理解三疣梭子蟹在氨氮脅迫下分子響應(yīng)機(jī)制提供了極具價(jià)值的基因信息。2三疣梭子蟹在氨氮脅迫下氨排出途徑的研究本...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 水生動(dòng)物在氨氮脅迫下解毒代謝機(jī)制的研究進(jìn)展
    2 甲殼動(dòng)物在氨氮脅迫下氨氮代謝終產(chǎn)物排出途徑的研究進(jìn)展
        2.1 甲殼動(dòng)物在氨氮脅迫下氨排出途徑的研究進(jìn)展
        2.2 甲殼動(dòng)物在氨氮脅迫下尿素\尿酸排出途徑的研究進(jìn)展
    3 基因表達(dá)譜在水生動(dòng)物抗脅迫研究中的應(yīng)用及進(jìn)展
第二章 三疣梭子蟹在氨氮脅迫下鰓基因表達(dá)譜的構(gòu)建與分析
    1 材料和方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)置
        1.3 樣品制備
        1.4 文庫構(gòu)建與測序
        1.5 GO分析與KEGG通路分析
        1.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證
    2. 結(jié)果
        2.1 測序數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估
        2.2 差異基因表達(dá)分析
        2.3 GO分析與KEGG通路分析
        2.4 DGE驗(yàn)證分析
    3. 討論
    4 小結(jié)
第三章 三疣梭子蟹在氨氮脅迫下氨排出途徑的研究
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)置
        1.3 血樣采集
        1.4 組織樣品制備
        1.5 血淋巴氨含量的測定
        1.6 Na⁺/K⁺-ATP酶(NKA)與V-H⁺-ATP酶活力測定
        1.7 超微切片制作
        1.8 實(shí)時(shí)熒光定量分析(q RT-PCR)
        1.9 數(shù)據(jù)處理與分析
    2 結(jié)果
        2.1 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹血氨含量的影響
        2.2 三疣梭子蟹在氨氮脅迫下鰓組織中Rh、K⁺通道、NHE和NKCC的基因表達(dá)分析
        2.3 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹鰓組織中NKA酶活力的影響
        2.4 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹鰓組織中與微管相關(guān)的胞吐排氨機(jī)制的研究
    3 討論
    4 小結(jié)
第四章 三疣梭子蟹在氨氮脅迫下尿酸、尿素代謝途徑與組織分布的研究
    1 材料和方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)置
        1.3 血樣采集
        1.4. 組織樣品制備
        1.5 實(shí)時(shí)熒光定量分析(q RT-PCR)
        1.6 含氮化合物含量測定
        1.7 數(shù)據(jù)處理與分析
    2 結(jié)果
        2.1 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹各組織中XO、CPSⅢ、ARG和URI基因表達(dá)水平的影響
        2.2 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹各組織中尿酸、尿素含量分布的影響
        2.3 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹鰓組織尿素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(UT)基因表達(dá)水平的影響
    3 討論
        3.1 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹氮代謝終產(chǎn)物合成途徑的影響
        3.2 氨氮脅迫對(duì)三疣梭子蟹尿酸、尿素組織分布的影響
    4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷
學(xué)術(shù)成果



本文編號(hào)：3911700