藻藍(lán)蛋白熒光強(qiáng)度的控制對(duì)于熒光探針在疾病治療中的有效應(yīng)用具有重要意義,本研究對(duì)藻藍(lán)蛋白的分子大小對(duì)其紫外吸收和熒光強(qiáng)度的影響進(jìn)行了探究。在SB9緩沖液中,將等量的藻藍(lán)蛋白在9種梯度濃度1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)的作用下交聯(lián),瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)明顯的分離條帶。隨后,檢測(cè)這些交聯(lián)的藻藍(lán)蛋白的紫外線吸收和熒光強(qiáng)度。結(jié)果表明:與對(duì)照相比,EDC濃度越小,形成的交聯(lián)藻藍(lán)蛋白分子量越小;而隨著交聯(lián)藻藍(lán)蛋白分子量減小,其最高吸收峰向波長(zhǎng)較長(zhǎng)的區(qū)域移動(dòng)(稱為紅移),并且其熒光強(qiáng)度增加。另外,用1 mol/mL的胰蛋白酶處理藻藍(lán)蛋白小分子,每隔一段時(shí)間檢測(cè)其紫外吸收和熒光強(qiáng)度,得出動(dòng)力學(xué)吸收光譜和動(dòng)力學(xué)熒光光譜。結(jié)果表明:與對(duì)照相比,酶切時(shí)間越長(zhǎng),最高吸收峰波長(zhǎng)紅移,熒光強(qiáng)度越弱。隨后,對(duì)酶切的藻藍(lán)蛋白進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,觀察到明顯的分離帶;聚丙烯酰胺凝膠電泳,檢測(cè)到明顯的熒光強(qiáng)度差異。以上結(jié)果證明藻藍(lán)蛋白被酶切成小分子。綜上,藻藍(lán)蛋白的分子大小對(duì)其紫外吸收和熒光強(qiáng)度有顯著影響,值得更多的研究關(guān)注。

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圖3酶切藻藍(lán)蛋白紫外吸收光譜

圖2藻藍(lán)蛋白與EDC交聯(lián)后的紫外吸收光譜圖圖4酶切藻藍(lán)蛋白瓊脂糖凝膠電泳

圖4酶切藻藍(lán)蛋白瓊脂糖凝膠電泳

圖3酶切藻藍(lán)蛋白紫外吸收光譜圖5聚丙烯酰胺凝膠電泳紫外熒光顯色

圖5聚丙烯酰胺凝膠電泳紫外熒光顯色

圖4酶切藻藍(lán)蛋白瓊脂糖凝膠電泳在探究小分子藻藍(lán)蛋白的紫外吸收和熒光強(qiáng)度變化時(shí)，藻藍(lán)蛋白經(jīng)胰蛋白酶酶切后的小分子也同樣影響了藻藍(lán)蛋白的吸光度、峰位置、熒光強(qiáng)度，影響程度的大小與酶切時(shí)間長(zhǎng)短有關(guān)。酶也是一種蛋白質(zhì)，很多條件選擇不當(dāng)也會(huì)使其結(jié)構(gòu)改變從而導(dǎo)致失活，比如酶切時(shí)間，酶切溫度....

圖1藻藍(lán)蛋白與EDC交聯(lián)后的瓊脂糖凝膠電泳

對(duì)9個(gè)實(shí)驗(yàn)組(不同濃度的EDC與0.001mg/L的藻藍(lán)蛋白交聯(lián))和1個(gè)藻藍(lán)蛋白對(duì)照組進(jìn)行紫外吸收檢測(cè)和熒光檢測(cè)(圖2)。交聯(lián)后藻藍(lán)蛋白最大特征吸收峰在620nm左右。由1～9號(hào)樣品可知，EDC濃度越小即分子量越小最大吸收峰紅移，吸光度增大，熒光強(qiáng)度越強(qiáng)，最大發(fā)射峰藍(lán)移。不同....

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