黃鱔(Monopterus albus)是我國重要的淡水名優(yōu)魚類之一。隨著需求的增加,其養(yǎng)殖面積在逐年增大。然而隨著養(yǎng)殖面積的擴大和養(yǎng)殖密度的提高,養(yǎng)殖水體富營養(yǎng)化現(xiàn)象越來越嚴重,致使養(yǎng)殖環(huán)境惡化,病毒病、細菌病、真菌病和寄生蟲病等病害不斷暴發(fā),尤其是細菌引起的出血病往往給黃鱔養(yǎng)殖業(yè)帶來毀滅性的打擊,嚴重制約了黃鱔養(yǎng)殖業(yè)的規(guī)�；a(chǎn)。嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)是引起黃鱔疾病、危害較為嚴重的細菌之一�？咕氖囚~體非特異性免疫系統(tǒng)的重要組成部分,當受到損傷或病原微生物侵襲時,魚體能迅速產(chǎn)生抗菌肽以預(yù)防和殺傷病原微生物。為研究黃鱔的抗病機理,本論文通過腹腔注射不同濃度的嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)進行誘導(dǎo),采用顯微測量、乙酸抽提及抑菌活性檢測、熒光定量PCR等方法,研究了該細菌脅迫對黃鱔的血細胞、重要器官乙酸提取物的抗菌活性以及hepcidin抗菌肽基因表達量的影響,以期為進一步探明黃鱔的抗病機理提供參考。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:1.人工感染嗜水氣單胞菌對黃鱔血細胞的影響隨著處理組菌濃度增加,感染24h的黃鱔紅細胞濃度逐漸減小,感染4...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1 黃鱔的研究現(xiàn)狀
    2 嗜水氣單胞菌的生物學(xué)特征及其危害
        2.1 嗜水氣單胞菌的生物學(xué)特點
        2.2 嗜水氣單胞菌的危害
    3 魚類抗菌肽的研究現(xiàn)狀
        3.1 魚類的免疫特點
        3.2 魚類抗菌肽的特點和類型
        3.3 抗菌肽的生物學(xué)功能
    4 熒光定量PCR技術(shù)及其應(yīng)用
        4.1 熒光定量PCR技術(shù)原理
        4.2 熒光定量PCR技術(shù)在基礎(chǔ)研究及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用
        4.3 熒光定量PCR技術(shù)在水產(chǎn)動物研究中的應(yīng)用
    5 本研究的目的和意義
第二章 人工感染嗜水氣單胞菌對黃鱔血細胞的影響
    1 材料與方法
        1.1 實驗動物與菌株
        1.2 主要實驗儀器
        1.3 方法
            1.3.1 飼養(yǎng)管理
            1.3.2 菌株的擴大培養(yǎng)
            1.3.3 黃鱔感染試驗
            1.3.4 樣品采集
            1.3.5 血涂片的制作與染色
            1.3.6 血細胞計數(shù)和顯微測量
        1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2 實驗結(jié)果
        2.1 黃鱔血細胞的種類及其形態(tài)特征
            2.1.1 紅細胞的形態(tài)特征
            2.1.2 白細胞的形態(tài)特征
            2.1.3 血栓細胞的形態(tài)特征
        2.2 嗜水氣單胞菌對黃鱔血液紅細胞濃度的影響
        2.3 嗜水氣單胞菌對黃鱔血液紅細胞形態(tài)的影響
        2.4 嗜水氣單胞菌對黃鱔血細胞組成的影響
    3 討論
第三章 嗜水氣單胞菌感染對黃鱔肝臟等四種組織器官抗菌活性的影響
    1 材料與方法
        1.1 實驗動物與菌株
        1.2 主要實驗儀器
        1.3 方法
            1.3.1 飼養(yǎng)管理
            1.3.2 菌株的擴大培養(yǎng)
            1.3.3 黃鱔感染實驗
            1.3.4 樣品采集
            1.3.5 提取抗菌肽粗提物
            1.3.6 抗菌活性的檢測
        1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2 實驗結(jié)果
        2.1 黃鱔肝臟等四種組織器官提取物的抗菌活性
        2.2 嗜水氣單胞菌感染 24h后黃鱔肝臟等組織器官提取物的抗菌活性
        2.3 嗜水氣單胞菌感染 48h后黃鱔肝臟等組織器官提取物的抗菌活性
        2.4 嗜水氣單胞菌感染 72h后黃鱔肝臟等組織器官提取物的抗菌活性
        2.5 嗜水氣單胞菌感染 96h后黃鱔肝臟等組織器官提取物的抗菌活性
    3 討論
第四章 嗜水氣單胞菌感染對黃鱔hepcidin抗菌肽基因表達的影響
    1 材料與方法
        1.1 試驗動物與菌株
        1.2 主要儀器與試劑
            1.2.1 實驗主要儀器
            1.2.2 主要試劑與試劑盒
        1.3 方法
            1.3.1 飼養(yǎng)管理
            1.3.2 菌株的擴大培養(yǎng)
            1.3.3 黃鱔感染試驗
            1.3.4 樣品采集
            1.3.5 引物設(shè)計與合成
            1.3.6 總RNA提取與檢測
            1.3.7 cDNA第一鏈合成
            1.3.8 PCR擴增目的基因
            1.3.9 瓊脂糖凝膠電泳檢測目的基因
            1.3.10 熒光定量PCR反應(yīng)條件
        1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2 實驗結(jié)果
        2.1 總RNA的提取
        2.2 β-actin cDNA PCR擴增
        2.3 Hepcidin cDNA PCR擴增
        2.4 嗜水氣單胞菌感染對黃鱔hepcidin抗菌肽基因表達的影響
            2.4.1 嗜水氣單胞菌感染黃鱔 24h hepcidin抗菌肽基因表達量的變化
            2.4.2 嗜水氣單胞菌感染黃鱔 48h hepcidin抗菌肽基因表達量的變化
            2.4.3 嗜水氣單胞菌感染黃鱔 72h hepcidin抗菌肽基因表達量的變化
            2.4.4 同一處理濃度不同處理時間hepcidin抗菌肽基因的表達量變化
    3 討論
結(jié)論
致謝
參考文獻
附錄



本文編號：3893056