發(fā)布時(shí)間：2024-01-25 19:43

　　外套膜是貝殼形成的重要器官,按照不同部位結(jié)構(gòu)特征和功能的不同,外套膜從殼頂向殼低方向大致可以分為三個(gè)區(qū)域:邊緣膜區(qū)(marginal zone)、套膜區(qū)(pallial zone)、中央膜區(qū)(central zone)。一般認(rèn)為,邊緣膜區(qū)主要參與棱柱層的形成,套膜區(qū)和中央膜區(qū)主要參與珍珠層的形成。為了探究外套膜中央膜與邊緣膜功能上的差異機(jī)制,課題組前期的研究中構(gòu)建了馬氏珠母貝中央膜與邊緣膜mRNA和miRNA轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù),本研究以此為基礎(chǔ),篩選中央膜和邊緣膜差異表達(dá)的miRNA,隨后通過(guò)mir-RACE技術(shù)驗(yàn)證篩選miRNA的序列,利用莖環(huán)引物熒光定量技術(shù)檢測(cè)篩選miRNA的組織表達(dá)差異。通過(guò)生物信息學(xué)分析篩選miRNA的靶點(diǎn),并使用雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miRNA與預(yù)測(cè)靶基因間的靶向關(guān)系。最后通過(guò)體內(nèi)miRNA過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn),結(jié)合莖環(huán)引物熒光定量和掃描電鏡觀(guān)察,檢測(cè)mi RNA對(duì)貝殼內(nèi)表面結(jié)構(gòu)及靶基因表達(dá)的影響,以此鑒定miRNA的功能及調(diào)控機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:1.miRNA的篩選和鑒定:通過(guò)分析馬氏珠母貝外套膜中央膜與邊緣膜miRNA數(shù)據(jù),從189條已知miRNA中分別篩選出3個(gè)邊緣膜...

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 馬氏珠母貝簡(jiǎn)介
        1.1.1 貝殼形成相關(guān)的生物礦化研究
        1.1.2 外套膜的結(jié)構(gòu)
    1.2 miRNA簡(jiǎn)介
        1.2.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 miRNA的生物學(xué)特點(diǎn)
        1.2.3 miRNA的生物合成
        1.2.4 miRNA的作用機(jī)制
        1.2.5 miRNA的研究方法
    1.3 研究目的和意義
2 馬氏珠母貝外套膜miRNA的篩選和驗(yàn)證
    2.1 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1.1 中央膜和邊緣膜差異miRNA的篩選
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)用貝
        2.1.3 質(zhì)粒、載體和細(xì)胞
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)所需引物
        2.1.5 主要試劑及設(shè)備
        2.1.6 實(shí)驗(yàn)所需主要溶液、試劑配制方法
        2.1.7 miRNA的提取
        2.1.8 mir-RACE獲得mi RNA序列
        2.1.9 miRNA邊緣膜中央膜組織差異表達(dá)分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 篩選結(jié)果
        2.2.2 mir-RACE模板與克隆條帶分析
        2.2.3 miRNA熒光定量結(jié)果分析
    2.3 討論
3 miRNA功能的研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)步驟
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 熒光定量結(jié)果
        3.2.2 SEM觀(guān)察miRNA過(guò)表達(dá)效果
    3.3 討論
        3.3.1 miRNA對(duì)貝殼形成的影響
4 馬氏珠母貝外套膜miRNA靶點(diǎn)篩選和靶向關(guān)系驗(yàn)證
    4.1 實(shí)驗(yàn)方法
        4.1.1 靶點(diǎn)的篩選
        4.1.2 靶基因目的片段載體的構(gòu)建
        4.1.3 靶位點(diǎn)突變載體的構(gòu)建
        4.1.4 雙熒光素酶系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miRNA對(duì)靶點(diǎn)的調(diào)控
        4.1.5 熒光定量檢測(cè)靶基因的表達(dá)量
        4.1.6 NPY序列驗(yàn)證
        4.1.7 miRNA過(guò)表達(dá)對(duì)靶基因的影響
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 靶點(diǎn)的篩選
        4.2.2 miRNA過(guò)表達(dá)對(duì)靶基因的影響
        4.2.3 目的片段載體構(gòu)建結(jié)果
        4.2.4 雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)
    4.3 討論
        4.3.1 miRNA靶點(diǎn)的篩選
        4.3.2 miRNA對(duì)貝類(lèi)礦化的影響
        4.3.3 miRNA對(duì)貝類(lèi)免疫的影響
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
導(dǎo)師簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3885443