發(fā)布時(shí)間：2024-01-21 08:48

　　草魚呼腸孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)感染引起的草魚出血病給我國草魚養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失,免疫學(xué)防治是解決該問題的有效途徑,但是卻受限于有限的魚類先天性免疫研究。黑色素瘤分化相關(guān)基因5(Melanoma differentiation associated gene 5,MDA5)屬于維甲酸誘導(dǎo)基因I樣受體(Retinoic acid-inducible gene-I like recptors,RLRs)家族,病毒感染后,MDA5通過自身的CARD結(jié)構(gòu)域募集下游接頭分子IPS-1(IFN-βpromoter stimulator 1)激活TBK1(TANK-binding kinase 1)�；罨腡BK1使IRF(Interferon regulatory factor)3和IRF7磷酸化,最終誘導(dǎo)IFN-I(Type I interferons)的產(chǎn)生。IRF3和IRF7是RLRs通路中的轉(zhuǎn)錄因子,在調(diào)控IFN-I的過程中發(fā)揮著重要的作用。本研究通過DNA重組技術(shù)構(gòu)建了草魚MDA5(Ctenopharyngodon idella MDA5,CiMDA...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 草魚出血病研究進(jìn)展
    1.2 魚類先天性免疫與模式識別受體
        1.2.1 魚類先天性免疫概述
        1.2.2 魚類模式識別受體
        1.2.3 MDA5研究進(jìn)展
    1.3 研究目的和意義
第二章 草魚MDA5及其結(jié)構(gòu)域表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和在CIK細(xì)胞中的表達(dá)
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 目的片段的擴(kuò)增和回收
        2.1.3 表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和鑒定
        2.1.4 細(xì)胞培養(yǎng)和傳代
        2.1.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染和質(zhì)粒表達(dá)檢測
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 CiMDA5結(jié)構(gòu)域分析
        2.2.2 目的片段的擴(kuò)增
        2.2.3 CiMDA5及CiMDA5結(jié)構(gòu)域表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和驗(yàn)證
        2.2.4 CiMDA5及CiMDA5結(jié)構(gòu)域表達(dá)質(zhì)粒在CIK細(xì)胞中的表達(dá)
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第三章 草魚MDA5基因的免疫功能
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器
        3.1.2 細(xì)胞刺激
        3.1.3 96孔板染色實(shí)驗(yàn)和GCRV病毒滴度
        3.1.4 總RNA的提取和實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 CiMDA5及CiMDA5結(jié)構(gòu)域的抗病毒作用
        3.2.2 GCRV刺激后CiIPS-1、CiIFN1、CiIL-1β 和CiMx1在轉(zhuǎn)基因細(xì)胞中的表達(dá)
        3.2.3 poly(I:C)刺激后CiIPS-1、CiIFN1、CiIL-1β 和CiMx1在轉(zhuǎn)基因細(xì)胞中的表達(dá)
        3.2.4 LPS刺激后CiIPS-1、CiIFN1、CiIL-1β 和CiMx1在轉(zhuǎn)基因細(xì)胞中的表達(dá)
        3.2.5 PGN刺激后CiIPS-1、CiIFN1、CiIL-1β 和CiMx1在轉(zhuǎn)基因細(xì)胞中的表達(dá)
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 草魚IRF3/7 在MDA5通路中的作用機(jī)制
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 引物設(shè)計(jì)和載體構(gòu)建
        4.1.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        4.1.4 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
        4.1.5 CiIRF7多克隆抗體的制備
        4.1.6 免疫印跡和免疫沉淀實(shí)驗(yàn)
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 CiIRF7的原核表達(dá)和抗體制備
        4.2.2 GCRV感染，poly(I:C)刺激和過表達(dá)CiMDA5對CiIRF3/7 的影響
        4.2.3 GCRV感染或poly(I:C)刺激后過表達(dá)CiMDA5對CiIRF3/7 的影響
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
縮略詞
致謝
作者簡介



本文編號：3881644