草魚呼腸孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)感染引起的草魚出血病給我國草魚養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的損失,免疫學防治是解決該問題的有效途徑,但是卻受限于有限的魚類先天性免疫研究。黑色素瘤分化相關基因5(Melanoma differentiation associated gene 5,MDA5)屬于維甲酸誘導基因I樣受體(Retinoic acid-inducible gene-I like recptors,RLRs)家族,病毒感染后,MDA5通過自身的CARD結構域募集下游接頭分子IPS-1(IFN-βpromoter stimulator 1)激活TBK1(TANK-binding kinase 1)�；罨腡BK1使IRF(Interferon regulatory factor)3和IRF7磷酸化,最終誘導IFN-I(Type I interferons)的產(chǎn)生。IRF3和IRF7是RLRs通路中的轉錄因子,在調控IFN-I的過程中發(fā)揮著重要的作用。本研究通過DNA重組技術構建了草魚MDA5(Ctenopharyngodon idella MDA5,CiMDA...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 草魚出血病研究進展
    1.2 魚類先天性免疫與模式識別受體
        1.2.1 魚類先天性免疫概述
        1.2.2 魚類模式識別受體
        1.2.3 MDA5研究進展
    1.3 研究目的和意義
第二章 草魚MDA5及其結構域表達質粒的構建和在CIK細胞中的表達
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 目的片段的擴增和回收
        2.1.3 表達質粒的構建和鑒定
        2.1.4 細胞培養(yǎng)和傳代
        2.1.5 細胞轉染和質粒表達檢測
    2.2 結果與分析
        2.2.1 CiMDA5結構域分析
        2.2.2 目的片段的擴增
        2.2.3 CiMDA5及CiMDA5結構域表達質粒的構建和驗證
        2.2.4 CiMDA5及CiMDA5結構域表達質粒在CIK細胞中的表達
    2.3 討論
    2.4 小結
第三章 草魚MDA5基因的免疫功能
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料和儀器
        3.1.2 細胞刺激
        3.1.3 96孔板染色實驗和GCRV病毒滴度
        3.1.4 總RNA的提取和實時熒光定量PCR
    3.2 結果與分析
        3.2.1 CiMDA5及CiMDA5結構域的抗病毒作用
        3.2.2 GCRV刺激后CiIPS-1、CiIFN1、CiIL-1β 和CiMx1在轉基因細胞中的表達
        3.2.3 poly(I:C)刺激后CiIPS-1、CiIFN1、CiIL-1β 和CiMx1在轉基因細胞中的表達
        3.2.4 LPS刺激后CiIPS-1、CiIFN1、CiIL-1β 和CiMx1在轉基因細胞中的表達
        3.2.5 PGN刺激后CiIPS-1、CiIFN1、CiIL-1β 和CiMx1在轉基因細胞中的表達
    3.3 討論
    3.4 小結
第四章 草魚IRF3/7 在MDA5通路中的作用機制
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 引物設計和載體構建
        4.1.3 細胞轉染
        4.1.4 雙熒光素酶報告實驗
        4.1.5 CiIRF7多克隆抗體的制備
        4.1.6 免疫印跡和免疫沉淀實驗
    4.2 結果與分析
        4.2.1 CiIRF7的原核表達和抗體制備
        4.2.2 GCRV感染，poly(I:C)刺激和過表達CiMDA5對CiIRF3/7 的影響
        4.2.3 GCRV感染或poly(I:C)刺激后過表達CiMDA5對CiIRF3/7 的影響
    4.3 討論
    4.4 小結
結論
參考文獻
附錄
縮略詞
致謝
作者簡介



本文編號：3881644