中華絨螯蟹是我國重要的養(yǎng)殖經(jīng)濟動物品種,是長江流域居民的重要傳統(tǒng)食物。隨著對其集約化養(yǎng)殖的大規(guī)模發(fā)展,由細菌,病毒或立克次氏體引起的各種疾病隨之大規(guī)模爆發(fā),造成了巨大的經(jīng)濟損失。因此針對該物種先天免疫系統(tǒng)以及生物防御機制的深入研究刻不容緩。先天免疫和適應性免疫(獲得性免疫)是動物宿主(Host)防御病毒、細菌和寄生蟲等病原體(Pathogen)的兩種免疫防御形式,兩者間本質(zhì)的區(qū)別在于：適應性免疫包括抗原特異性識別和免疫記憶,而先天免疫則沒有。目前認為,先天免疫存在于所有后生動物中,而適應性免疫則僅存在于高等脊椎動物。無脊椎動物先天免疫“非己”識別的基礎(chǔ)是其體內(nèi)存在某些模式識別受體(PRRs),能夠特異性地識別并結(jié)合病原體表面保守的病原相關(guān)分子模式(PAMPs),如脂多糖(LPS)、肽聚糖(PGN)和葡聚糖(GLU)等。通過識別PAMPs,這些受體可以激活免疫系統(tǒng)中的蛋白酶以及通過免疫細胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導途徑引發(fā)免疫反應。本研究通過RNA-Seq高通量二代測序技術(shù),構(gòu)建了中華絨螯蟹血細胞經(jīng)病原相關(guān)模式分子差異誘導后的轉(zhuǎn)錄組文庫,從中篩選得到了無脊椎動物重要的模式識別受體分子。其中C型凝集素蛋...

【文章頁數(shù)】：134 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    第一節(jié) 無脊椎動物免疫系統(tǒng)
        1.1 引言
        1.2 細胞免疫
        1.3 體液免疫
    第二節(jié) 無脊椎動物免疫特異性分子機制
        2.1 引言
        2.2 免疫分子通過基因組分子多樣性產(chǎn)生的免疫特異性
        2.3 免疫分子之間通過協(xié)同交互作用產(chǎn)生的免疫特異性
        2.4 免疫分子通過劑量效應產(chǎn)生的免疫特異性
    第三節(jié) 研究意義及研究方案
        3.1 研究意義
        3.2 研究方案
第二章 基于RNA-Seq的中華絨螯蟹免疫特異性研究
    第一節(jié) 前言
    第二節(jié) 材料與方法
        2.1 實驗動物免疫刺激與樣本收集
        2.2 核酸提取和質(zhì)量檢驗
        2.3 基于RNA-Seq的高通量二代測序及文庫構(gòu)建
        2.4 數(shù)據(jù)分析
    第三節(jié) 結(jié)果
        3.1 核酸提取及質(zhì)量控制
        3.2 測序結(jié)果統(tǒng)計分析
        3.3 序列組裝
        3.4 序列比對分析和基因注釋
        3.5 KEGG代謝通路注釋分析
        3.6 免疫基因注釋
        3.7 免疫基因的差異誘導表達特異性分析
    第四節(jié) 討論
第三章 C型凝集素家族分子EsLecA和EsLecG的免疫特異性功能研究
    第一節(jié) 前言
    第二節(jié) 材料與方法
        2.1 實驗動物免疫刺激與樣本收集
        2.2 總RNA提取和第一鏈cDNA合成
        2.3 EsLecA和EsLecG的基因全長克隆
        2.4 序列比對分析和聚類分析
        2.5 EsLecA和EsLecG的組織表達檢測
        2.6 LPS免疫刺激后的EsLecA和EsLecG的誘導表達檢測
        2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        2.8 重組蛋白表達載體構(gòu)建
        2.9 重組rEsLectin蛋白的表達和純化
        2.10 蛋白印記檢測實驗
        2.11 重組rEsLectins蛋白的微生物凝集活性檢測
        2.12 重組rEsLectins蛋白的微生物生長抑制活性檢測
        2.13 重組rEsLectins蛋白的抗菌活性檢測
        2.14 重組rEsLectins蛋白的細胞調(diào)理作用檢測
    第三節(jié) 結(jié)果
        3.1 EsLecA和EsLecG基因的克隆和序列分析
        3.2 EsLecA和EsLecG的同源序列聚類分析
        3.3 EsLecA和EsLecG的組織表達分析
        3.4 LPS體內(nèi)免疫刺激后EsLecA和EsLecG的誘導表達模式分析
        3.5 重組rEsLectins蛋白的表達和純化
        3.6 重組rEsLectin蛋白的微生物結(jié)合活性
        3.7 重組rEsLectin蛋白的微生物凝集活性
        3.8 重組rEsLectin蛋白的微生物生長抑制活性和抗菌活性
        3.9 重組rEsLectin蛋白的血細胞調(diào)理活性分析
    第四節(jié) 討論
第四章 肝胰腺特異性表達C型凝集素家族分子EsLecF的免疫特異性功能研究
    第一節(jié) 引言
    第二節(jié) 材料與方法
        2.1 實驗動物體內(nèi)免疫刺激和樣品收集
        2.2 總RNA的提取和第一條cDNA鏈的合成
        2.3 EsLecF基因cDNA全長克隆
        2.4 EsLecF基因表達模式分析
        2.5 重組蛋白表達載體的構(gòu)建
        2.6 重組rEsLecF蛋白的表達和純化
        2.7 蛋白印記檢測實驗
        2.8 重組rEsLecF蛋白的微生物凝集實驗
        2.9 重組rEsLecF蛋白的微生物生長抑制實驗
        2.10 重組rEsLecF蛋白的抗菌活性檢測
        2.11 重組rEsLecF蛋白的細胞調(diào)理活性檢測
    第三節(jié) 結(jié)果
        3.1 EsLecF基因序列分析
        3.2 EsLecF氨基酸序列聚類分析
        3.3 EsLecF的轉(zhuǎn)錄表達模式分析
        3.4 重組rEsLecF蛋白的表達與純化
        3.5 重組rEsLecF蛋白的微生物結(jié)合活性
        3.6 重組rEsLecF蛋白的微生物凝集活性
        3.7 重組rEsLecF蛋白的微生物生長抑制活性和殺菌活性
        3.8 重組rEsLecF蛋白的細胞調(diào)理活性
    第四節(jié) 討論
第五章 免疫球蛋白超家族基因Dscam的外顯子可變剪切及其免疫誘導特異性研究
    第一節(jié) 前言
    第二節(jié) 材料方法
        2.1 實驗動物的免疫刺激和樣品收集
        2.2 總RNA抽提和cDNA第一鏈合成
        2.3 EsDscam基因全長的克隆
        2.4 EsDscam外顯子的可變剪切檢測
        2.5 序列比對分析和聚類分析
        2.6 EsDscam基因的組織表達和免疫誘導表達檢測
        2.7 EsDscam跨模型和分泌型可變剪切亞型的檢測
        2.8 蛋白印記檢測
        2.9 EsDscam的細胞定位
        2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    第三節(jié) 結(jié)果
        3.1 EsDscam的序列分析
        3.2 EsDscam外顯子可變剪切
        3.3 EsDscam序列比對分析和聚類分析
        3.4 EsDscam的組織表達特異性
        3.5 EsDscam的差異免疫誘導表達特異性分析
        3.6 EsDscam的跨膜型和分泌型可變剪切亞型檢測
        3.7 EsDscam的亞細胞定位
    第四節(jié) 討論
本研究的特色與創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3880763