大菱鲆（Scophthalmus maximus）作為重要的海水養(yǎng)殖魚類品種之一，它的養(yǎng)殖范圍遍布世界各地，也包括我國北方沿海地區(qū)。然而，大菱鲆在海水養(yǎng)殖過程中極易受到包括大菱鲆虹彩病毒（TRBIV）在內(nèi)的多種致病微生物的感染，特別是隨著養(yǎng)殖規(guī)模的迅速擴(kuò)大，其病害問題顯得日益嚴(yán)重，使大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)蒙受了巨大經(jīng)濟(jì)損失。作為最具代表性的模式識別受體，Toll樣受體（Toll-like rceptor，TLRs）不但能夠通過識別病原，激活下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，在非特異性免疫（先天性免疫）中發(fā)揮重要的作用，而且還能激活特異性免疫（獲得性免疫），是聯(lián)系先天性免疫和獲得性免疫的橋梁。研究證明，髓樣分化因子88（MyD88）和β干擾素TIR結(jié)構(gòu)域銜接蛋白（TIR domain-containing adaptor inducinginterferon-β, TRIF）是TLRs介導(dǎo)的信號通路中兩類重要的接頭分子，他們能夠分別介導(dǎo)MyD88依賴型信號通路和TRIF依賴型信號通路，使轉(zhuǎn)錄因子活化，并最終促使促炎因子釋放和I型干擾素等的釋放，從而調(diào)動獲得性免疫應(yīng)答。對大菱鲆魚Toll樣受體進(jìn)行相關(guān)研究將有助于更...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 先天性免疫系統(tǒng)
    1.2 TLR 的發(fā)現(xiàn)、結(jié)構(gòu)及分布
        1.2.1 TLR 的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 TLR 的結(jié)構(gòu)
        1.2.3 TLR 的分布
        1.2.4 TLRs 家族成員分類及配體
        1.2.5 TLR 信號通路
    1.3 魚類 TLRS 研究概述
        1.3.1 魚類 TLRs 的種類
        1.3.2 TLR22 的研究進(jìn)展
    1.4 本研究的目的及意義
第二章 大菱鲆 TLR22 基因的克隆及序列分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 魚、載體、菌株
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 試劑及相關(guān)溶液
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 組織獲取
        2.2.2 總 RNA 提取
        2.2.3 cDNA 第一鏈的制備
        2.2.4 大菱鲆 TLR22 全長 cDNA 的克隆
        2.2.5 大菱鲆 TLR22 基因組 DNA 的克隆
        2.2.6 分析與構(gòu)建進(jìn)化樹
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
        2.3.1 RNA 質(zhì)量檢測
        2.3.2 cDNA 序列的克隆及測序結(jié)果
        2.3.3 TLR22 基因組 DNA 序列的克隆及測序結(jié)果
        2.3.4 大菱鲆 TLR22 系統(tǒng)進(jìn)化分析
    2.4 討論
第三章 大菱鲆 TLR22 的組織分布研究
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 大菱鲆
        3.1.2 儀器與設(shè)備
        3.1.3 試劑及溶液
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 組織的獲取
        3.2.2 總 RNA 的提取及其質(zhì)量檢測
        3.2.3 cDNA 第一鏈的制備
        3.2.4 引物的設(shè)計
        3.2.5 qPCR 檢測
        3.2.6 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果分析
    3.4 討論
第四章 大菱鲆 TLR22 基因的表達(dá)分析
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 刺激物
        4.1.2 儀器與設(shè)備
        4.1.3 試劑及相關(guān)溶液
        4.1.4 主要溶液及溶液的配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 poly I:C、TRBIV 和 LPS 感染大菱鲆魚體
        4.2.2 模板的制備
        4.2.3 cDNA 第一鏈的制備
        4.2.4 qPCR 檢測
        4.2.5 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 Poly I:C 感染大菱鲆后 TLR22 基因的表達(dá)
        4.3.2 TRBIV 感染大菱鲆后 TLR22 基因的表達(dá)
        4.3.3 LPS 感染大菱鲆后 TLR22 基因的表達(dá)
    4.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷
學(xué)術(shù)論文



本文編號：3876817