近年來(lái),高密度、集約化水產(chǎn)養(yǎng)殖模式的推廣,導(dǎo)致魚類營(yíng)養(yǎng)性脂肪肝頻繁發(fā)生,已成為制約水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的重要因素。飼料營(yíng)養(yǎng)不均衡,過飽食投喂等原因均會(huì)引起魚類脂肪肝的發(fā)生,進(jìn)而導(dǎo)致病魚生長(zhǎng)緩慢、飼料利用率降低、抗病和抗應(yīng)激能力減弱等。目前,對(duì)脂肪肝的發(fā)生機(jī)制仍缺乏足夠的了解,因此,探究魚類脂肪肝的發(fā)生機(jī)制并尋求可能的防治方法具有重要意義。本試驗(yàn)以團(tuán)頭魴為研究對(duì)象,建立原代肝細(xì)胞脂肪沉積模型,對(duì)脂肪代謝與沉積機(jī)制進(jìn)行研究,并在體內(nèi)外試驗(yàn)研究羥基酪醇對(duì)脂肪肝的緩解作用。試驗(yàn)內(nèi)容包括四部分:(1)團(tuán)頭魴肝細(xì)胞原代培養(yǎng)方法的建立本試驗(yàn)旨在建立一種穩(wěn)定可靠的團(tuán)頭魴肝細(xì)胞原代培養(yǎng)方法。首先,采用室溫胰酶消化法進(jìn)行肝細(xì)胞分離,并使用percoll分離液結(jié)合密度梯度離心法純化肝細(xì)胞;細(xì)胞在含15%FBS的L-15培養(yǎng)基中重懸,然后臺(tái)盼藍(lán)染色法測(cè)定細(xì)胞活力及濃度;最后于恒溫箱培養(yǎng)并定期觀察;在培養(yǎng)24、48、72h后,分別測(cè)定上清中的AST、ALT及LDH活性;以分析細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。結(jié)果表明,分離純化后的肝細(xì)胞活力值達(dá)90%以上;顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),培養(yǎng)48h肝細(xì)胞緊密連接呈島狀且形態(tài)趨于穩(wěn)定;上清中的AST、...

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要符號(hào)表
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 魚類脂肪代謝的研究現(xiàn)狀
        1.1.1 脂類的生理功能
        1.1.2 脂肪的消化和吸收
        1.1.3 脂肪的合成
        1.1.4 脂肪的氧化分解
        1.1.5 脂肪的轉(zhuǎn)運(yùn)
        1.1.6 魚類脂代謝的調(diào)控因子
    1.2 蛋白激酶AMPK的研究進(jìn)展
        1.2.1 AMPK的結(jié)構(gòu)及激活機(jī)制
        1.2.2 AMPK與脂肪代謝
        1.2.3 AMPK與細(xì)胞線粒體調(diào)控
        1.2.4 AMPK的調(diào)控因子
    1.3 研究目的及意義
    1.4 研究?jī)?nèi)容
第2章 團(tuán)頭魴肝細(xì)胞原代培養(yǎng)方法的建立
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗(yàn)用魚與管理
        2.1.2 原代肝細(xì)胞的分離、純化、觀察培養(yǎng)及樣品采集
        2.1.3 上清液中AST、ALT及LDH的活性
        2.1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 原代肝細(xì)胞活力
        2.2.2 原代肝細(xì)胞的形態(tài)觀察
        2.2.3 上清液中AST、ALT及LDH活性
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第3章 團(tuán)頭魴原代肝細(xì)胞脂肪沉積模型的建立
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        3.1.2 CCK-8 法測(cè)定細(xì)胞活性
        3.1.3 BCA法測(cè)定蛋白濃度
        3.1.4 油紅O染色
        3.1.5 肝細(xì)胞內(nèi)脂肪水平及上清AST、ALT和LDH活性測(cè)定
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 油酸對(duì)原代肝細(xì)胞存活率的影響
        3.2.2 油酸對(duì)團(tuán)頭魴原代肝細(xì)胞內(nèi)脂肪沉積的影響
        3.2.3 油酸對(duì)上清AST、ALT及LDH活性的影響
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第4章 蛋白激酶AMPK在團(tuán)頭魴肝細(xì)胞脂肪代謝中的作用
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        4.1.2 總RNA提取、反轉(zhuǎn)錄及熒光定量PCR
        4.1.3 蛋白免疫印跡
        4.1.4 線粒體相關(guān)酶活測(cè)定
        4.1.5 線粒體原位示蹤
        4.1.6 細(xì)胞內(nèi)GPX和SOD活性以及ROS和 MDA含量的測(cè)定
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 二甲雙胍劑量篩選
        4.2.2 細(xì)胞脂肪水平及上清液AST、ALT和LDH的活性
        4.2.3 二甲雙胍對(duì)AMPK及P-AMPK蛋白水平的影響
        4.2.4 脂肪代謝相關(guān)基因的表達(dá)水平
        4.2.5 肝細(xì)胞內(nèi)的線粒體狀態(tài)
        4.2.6 肝細(xì)胞的氧化還原反應(yīng)狀態(tài)
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
第5章 羥基酪醇在團(tuán)頭魴肝臟脂肪代謝中的作用
    5.1 材料與方法
        5.1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        5.1.2 線粒體相關(guān)酶活測(cè)定
        5.1.3 肝細(xì)胞線粒體DNA拷貝數(shù)定量
        5.1.4 線粒體膜電位測(cè)定
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 細(xì)胞試驗(yàn)
        5.2.2 養(yǎng)殖試驗(yàn)
    5.3 討論
        5.3.1 細(xì)胞試驗(yàn)
        5.3.2 養(yǎng)殖試驗(yàn)
    5.4 小結(jié)
全文總結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3855289