近年來，水產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展，已逐漸成為中國農(nóng)業(yè)中發(fā)展較快的產(chǎn)業(yè)之一，在全球水產(chǎn)總量中占有舉足輕重的地位。但在我國水產(chǎn)養(yǎng)殖規(guī)模不斷壯大的同時，各種病害也隨之而來。對蝦養(yǎng)殖業(yè)作為我國海水養(yǎng)殖業(yè)的支柱產(chǎn)業(yè)之一，也深受多種病害困擾，我國對蝦養(yǎng)殖業(yè)每年因?qū)ξr病害流行造成的損失高達(dá)數(shù)十億元。利用靈敏、高效的病原檢測技術(shù)加強(qiáng)對蝦苗種或養(yǎng)殖期特定病原的定期檢測被認(rèn)為是防控對蝦病害流行的有效手段。等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)作為一種新興的檢測手段，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于人類醫(yī)學(xué)、動物衛(wèi)生等相關(guān)病原檢測中。為了加強(qiáng)兩種重要對蝦病害——對蝦白斑病（White spot disease，WSD）和黃頭�。╕ellow head disease，YHD）的防控，本研究分別建立了對蝦白斑綜合征病毒（White spot syndromevirus，WSSV）、黃頭病毒（Yellow head virus，YHV）的快速、高靈敏等溫?cái)U(kuò)增檢測技術(shù)。 本研究根據(jù)對蝦WSSV基因組的保守序列設(shè)計(jì)合成5條特異性引物，通過對反應(yīng)體系中的Mg2+、dNTPs等試劑組分和溫度、時間等反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，建立了WSSV的交叉引物等溫?cái)U(kuò)增（cross primi...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 分子生物學(xué)方法在水產(chǎn)養(yǎng)殖動物病原檢測中的應(yīng)用
        1.1.1 等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
        1.1.2 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（Polymerase chain reaction, PCR）
        1.1.3 限制性酶切技術(shù)
    1.2 幾種水產(chǎn)養(yǎng)殖動物病原概述
        1.2.1 對蝦白斑綜合征病毒（WSSV）
        1.2.2 黃頭病毒（YHV）
第二章 對蝦白斑綜合征病毒交叉引物等溫?cái)U(kuò)增檢測方法的建立及應(yīng)用
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1.1 病料來源
        2.1.2 DNA 模板的提取及 WSSV 陽性模板的確定
        2.1.3 WSSV-CPA 引物設(shè)計(jì)
        2.1.4 WSSV-CPA 反應(yīng)條件
        2.1.5 WSSV-CPA 反應(yīng)體系及反應(yīng)條件的優(yōu)化
        2.1.6 WSSV-CPA 的特異性
        2.1.7 WSSV-CPA 產(chǎn)物酶切鑒定
        2.1.8 WSSV 的 CPA 與套式 PCR 檢測方法的靈敏度比較
        2.1.9 WSSV 的 CPA 與 TagMan 探針法 qPC 方法的靈敏度比較
        2.1.10 WSSV 的 CPA 與 LAMP 方法的靈敏度比較
        2.1.11 WSSV qCPA 檢測方法的建立
        2.1.12 利用 WSSV-CPA 進(jìn)行實(shí)際樣品檢測
    2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.2.1 WSSV-CPA 反應(yīng)的優(yōu)化結(jié)果
        2.2.2 WSSV-CPA 方法的特異性結(jié)果
        2.2.3 WSSV-CPA 產(chǎn)物的酶切鑒定結(jié)果
        2.2.4 WSSV-CPA 與 WSSV 套式 PCR 檢測方法的靈敏度比較結(jié)果
        2.2.5 WSSV-CPA 與 WSSV-qPCR 檢測方法的靈敏度比較結(jié)果
        2.2.6 WSSV-CPA 與 WSSV-LAMP 檢測方法的靈敏度比較結(jié)果
        2.2.7 WSSV qCPA 檢測方法的建立
        2.2.8 利用 WSSV-CPA 檢測對蝦組織樣品結(jié)果
    2.3 討論
第三章 黃頭病毒中國株 rRT-LAMP 檢測方法的建立
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.1.1 病料來源
        3.1.2 RNA 模板的提取
        3.1.3 引物設(shè)計(jì)
        3.1.4 rRT- LAMP 反應(yīng)條件
        3.1.5 rRT- LAMP 反應(yīng)體系和反應(yīng)條件的優(yōu)化
        3.1.6 rRT- LAMP 產(chǎn)物酶切鑒定
        3.1.7 RNA 標(biāo)準(zhǔn)品的制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.1.8 rRT-LAMP 靈敏度分析及與 rRT-PCR 的比較
        3.1.9 rRT-LAMP 靈敏度分析及與 RT-LAMP 試劑盒的比較
        3.1.10 rRT-LAMP 的特異性檢驗(yàn)
        3.1.11 rRT-LAMP 實(shí)際樣品檢測
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 rRT-LAMP 反應(yīng)體系的優(yōu)化結(jié)果
        3.2.2 rRT-LAMP 產(chǎn)物的酶切鑒定結(jié)果
        3.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.2.4 YHV rRT-LAMP靈敏度檢測分析及與rRT-PCR的比較結(jié)果
        3.2.5 rRT-LAMP靈敏度分析及與RT-LAMP試劑盒的比較
        3.2.6 特異性檢測結(jié)果
        3.2.7 實(shí)際樣品檢測結(jié)果
    3.3 討論
第四章 對蝦白斑綜合征病毒與黃頭病毒中國株的分子流行病學(xué)分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 對蝦樣品的來源
        4.1.2 樣品處理
    4.2 WSSV 和 YHV 流行病學(xué)初步分析
        4.2.1 對蝦種類與病毒陽性比率
        4.2.2 地理位置與病毒陽性比率
        4.2.3 兩種病毒陽性檢出比率
    4.3 討論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3852792