近年來，水產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展，已逐漸成為中國農(nóng)業(yè)中發(fā)展較快的產(chǎn)業(yè)之一，在全球水產(chǎn)總量中占有舉足輕重的地位。但在我國水產(chǎn)養(yǎng)殖規(guī)模不斷壯大的同時，各種病害也隨之而來。對蝦養(yǎng)殖業(yè)作為我國海水養(yǎng)殖業(yè)的支柱產(chǎn)業(yè)之一，也深受多種病害困擾，我國對蝦養(yǎng)殖業(yè)每年因對蝦病害流行造成的損失高達數(shù)十億元。利用靈敏、高效的病原檢測技術加強對蝦苗種或養(yǎng)殖期特定病原的定期檢測被認為是防控對蝦病害流行的有效手段。等溫擴增技術作為一種新興的檢測手段，已經(jīng)廣泛應用于人類醫(yī)學、動物衛(wèi)生等相關病原檢測中。為了加強兩種重要對蝦病害——對蝦白斑�。╓hite spot disease，WSD）和黃頭病（Yellow head disease，YHD）的防控，本研究分別建立了對蝦白斑綜合征病毒（White spot syndromevirus，WSSV）、黃頭病毒（Yellow head virus，YHV）的快速、高靈敏等溫擴增檢測技術。 本研究根據(jù)對蝦WSSV基因組的保守序列設計合成5條特異性引物，通過對反應體系中的Mg2+、dNTPs等試劑組分和溫度、時間等反應條件進行優(yōu)化，建立了WSSV的交叉引物等溫擴增（cross primi...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 分子生物學方法在水產(chǎn)養(yǎng)殖動物病原檢測中的應用
        1.1.1 等溫擴增技術
        1.1.2 聚合酶鏈反應技術（Polymerase chain reaction, PCR）
        1.1.3 限制性酶切技術
    1.2 幾種水產(chǎn)養(yǎng)殖動物病原概述
        1.2.1 對蝦白斑綜合征病毒（WSSV）
        1.2.2 黃頭病毒（YHV）
第二章 對蝦白斑綜合征病毒交叉引物等溫擴增檢測方法的建立及應用
    2.1 實驗材料與方法
        2.1.1 病料來源
        2.1.2 DNA 模板的提取及 WSSV 陽性模板的確定
        2.1.3 WSSV-CPA 引物設計
        2.1.4 WSSV-CPA 反應條件
        2.1.5 WSSV-CPA 反應體系及反應條件的優(yōu)化
        2.1.6 WSSV-CPA 的特異性
        2.1.7 WSSV-CPA 產(chǎn)物酶切鑒定
        2.1.8 WSSV 的 CPA 與套式 PCR 檢測方法的靈敏度比較
        2.1.9 WSSV 的 CPA 與 TagMan 探針法 qPC 方法的靈敏度比較
        2.1.10 WSSV 的 CPA 與 LAMP 方法的靈敏度比較
        2.1.11 WSSV qCPA 檢測方法的建立
        2.1.12 利用 WSSV-CPA 進行實際樣品檢測
    2.2 實驗結果
        2.2.1 WSSV-CPA 反應的優(yōu)化結果
        2.2.2 WSSV-CPA 方法的特異性結果
        2.2.3 WSSV-CPA 產(chǎn)物的酶切鑒定結果
        2.2.4 WSSV-CPA 與 WSSV 套式 PCR 檢測方法的靈敏度比較結果
        2.2.5 WSSV-CPA 與 WSSV-qPCR 檢測方法的靈敏度比較結果
        2.2.6 WSSV-CPA 與 WSSV-LAMP 檢測方法的靈敏度比較結果
        2.2.7 WSSV qCPA 檢測方法的建立
        2.2.8 利用 WSSV-CPA 檢測對蝦組織樣品結果
    2.3 討論
第三章 黃頭病毒中國株 rRT-LAMP 檢測方法的建立
    3.1 實驗材料與方法
        3.1.1 病料來源
        3.1.2 RNA 模板的提取
        3.1.3 引物設計
        3.1.4 rRT- LAMP 反應條件
        3.1.5 rRT- LAMP 反應體系和反應條件的優(yōu)化
        3.1.6 rRT- LAMP 產(chǎn)物酶切鑒定
        3.1.7 RNA 標準品的制備及標準曲線的建立
        3.1.8 rRT-LAMP 靈敏度分析及與 rRT-PCR 的比較
        3.1.9 rRT-LAMP 靈敏度分析及與 RT-LAMP 試劑盒的比較
        3.1.10 rRT-LAMP 的特異性檢驗
        3.1.11 rRT-LAMP 實際樣品檢測
    3.2 實驗結果
        3.2.1 rRT-LAMP 反應體系的優(yōu)化結果
        3.2.2 rRT-LAMP 產(chǎn)物的酶切鑒定結果
        3.2.3 標準曲線的建立
        3.2.4 YHV rRT-LAMP靈敏度檢測分析及與rRT-PCR的比較結果
        3.2.5 rRT-LAMP靈敏度分析及與RT-LAMP試劑盒的比較
        3.2.6 特異性檢測結果
        3.2.7 實際樣品檢測結果
    3.3 討論
第四章 對蝦白斑綜合征病毒與黃頭病毒中國株的分子流行病學分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 對蝦樣品的來源
        4.1.2 樣品處理
    4.2 WSSV 和 YHV 流行病學初步分析
        4.2.1 對蝦種類與病毒陽性比率
        4.2.2 地理位置與病毒陽性比率
        4.2.3 兩種病毒陽性檢出比率
    4.3 討論
參考文獻
致謝



本文編號：3852792