轉(zhuǎn)基因技術(shù)是改良生物性狀的重要手段，其主要方法包括顯微注射、精子 介導(dǎo)法、電穿孔等。顯微注射在魚類的應(yīng)用中存在一些技術(shù)難題，一直未有突破性的進(jìn)展。精子介導(dǎo)法轉(zhuǎn)基因（Sperm-mediated gene transfer，SMGT）操作簡便、成本低，同時避開了魚類受精卵各種特性的限制，在轉(zhuǎn)基因魚的制備中具有優(yōu)勢。目前魚類SMGT技術(shù)應(yīng)用仍處于初步階段，存在不穩(wěn)定，重復(fù)性差等問題，不同魚種需要針對性地研究具體的精子介導(dǎo)方式和處理條件。真鯛（Pagrus major）、大菱鲆（Scophthalmus maximus）是我國重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)品種，本論文以這兩種海水魚為材料，研究分析外源DNA對其精子生理特性的影響及其轉(zhuǎn)染效果，進(jìn)一步實驗探討這兩種海水魚類SMGT技術(shù)的可行性和改進(jìn)方法，主要結(jié)果如下： 1）外源DNA對真鯛精子活力的影響并不顯著，僅在質(zhì)粒pPmvasGFP達(dá)到2μg/106個精子的高濃度時，精子的運動速度稍有下降，5μg/106個精子的pPmvasGFP質(zhì)粒孵育精子12h后，平均直線速度（VSL）相較于對照組低22.0%，但平均曲線速度（VCL）和精子活率（MOT）和并未減...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 SMGT 技術(shù)概述
        1.1.1 SMGT 技術(shù)的起源與發(fā)展
        1.1.2 SMGT 技術(shù)的改進(jìn)
        1.1.3 SMGT 技術(shù)的機(jī)理研究
    1.2 SMGT 技術(shù)在魚類的研究進(jìn)展
        1.2.1 研究成果和現(xiàn)狀
        1.2.2 海水魚類 SMGT
        1.2.3 魚類 SMGT 的影響因素
    1.3 本研究的目的及意義
第二章 真鯛精子在外源 DNA 下的生理特性及其 SMGT 初探
    2.1 研究背景
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 試劑和儀器
        2.2.3 質(zhì)粒提取和 DNA 片段合成
        2.2.4 精子解凍和精漿去除
        2.2.5 外源 DNA 孵育真鯛精子與檢測觀察
        2.2.6 真鯛人工授精實驗和仔魚檢測
        2.2.7 數(shù)據(jù)分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 外源 DNA 對真鯛精子活力的影響
        2.3.2 Fluorescein-DNA 孵育后熒光觀察
        2.3.3 PCR 檢測
        2.3.4 真鯛 SMGT 實驗和子代檢測
    2.4 討論
第三章 大菱鲆精子在外源 DNA 下的生理特性及其 SMGT 初探
    3.1 研究背景
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 試劑和儀器
        3.2.3 質(zhì)粒的提取和 DNA 片段合成
        3.2.4 精子解凍和精漿去除
        3.2.5 外源 DNA 孵育大菱鲆精子與檢測觀察
        3.2.6 大菱鲆人工授精實驗和仔魚檢測
        3.2.7 數(shù)據(jù)分析
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 外源 DNA 對大菱鲆精子活力的影響
        3.3.2 Fluorescein-DNA 孵育后熒光觀察
        3.3.3 PCR 檢測
        3.3.4 大菱鲆人工授精實驗和子代檢測
    3.4 討論
第四章 轉(zhuǎn)基因相關(guān)工作——大菱鲆 vasa 基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列獲得及表達(dá)載體構(gòu)建
    4.1 研究背景
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 試劑與儀器
        4.2.3 大菱鲆 vasa 基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列克隆
        4.2.4 大菱鲆 vasa 基因 5’調(diào)控序列分析
        4.2.5 pSMvasGFP 轉(zhuǎn)基因表達(dá)載體構(gòu)建
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 大菱鲆 vasa 基因 5’和 3’側(cè)翼序列克隆
        4.3.2 大菱鲆 vasa 基因 5’調(diào)控序列的生物信息學(xué)分析
        4.3.3 pSMvasGFP 表達(dá)載體構(gòu)建
    4.4 討論
參考文獻(xiàn)
作者簡介
文章撰寫和發(fā)表情況



本文編號：3852111