17α-乙炔基雌二醇（EE2）是內(nèi)分泌干擾物中一種具有強(qiáng)雌激素效應(yīng)的人工合成化合物，能對(duì)動(dòng)物體內(nèi)基因尤其是性別特異性基因的表達(dá)產(chǎn)生顯著影響。稀有鮈鯽對(duì)外源性激素很敏感，是研究EDCs理想的試驗(yàn)動(dòng)物。 由生殖系a因子（figla）、叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子2（foxl2）、聯(lián)會(huì)復(fù)合體蛋白3（scp3）、Sry相關(guān)的高遷移率族蛋白9a（sox9a）、卵黃蛋白原（vtg）、透明體蛋白2（zp2）和透明體蛋白3（zp3）等基因編碼的蛋白質(zhì)在性腺分化或繁殖中充當(dāng)重要的角色。在本研究中，首先通過常規(guī)PCR和RACE方法克隆獲得稀有鮈鯽figla、scp3、sox9a和zp3四個(gè)基因的cDNA全長序列，并采用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測它們在稀有鮈鯽成魚中的組織分布情況。然后用濃度為1、5、25和125ng/L的EE2暴露稀有鮈鯽3天和6天后，實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測性腺中figla、foxl2、scp3、sox9a、vtg、zp2和zp3以及肝臟中vtg、zp2和zp3表達(dá)量變化，旨在探究這些基因?qū)E2的響應(yīng)能力以及尋找對(duì)EE2早期預(yù)警的敏感生物標(biāo)志物。最后通過染色體步移方式克隆獲得figla、foxl2、sox...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 前言
    1.2 內(nèi)分泌干擾物
        1.2.1 EDCs 概述
        1.2.2 EDCs 的毒害作用
    1.3 EDCs 的分子標(biāo)志物
        1.3.1 figla
        1.3.2 foxl2
        1.3.3 scp3
        1.3.4 sox9
        1.3.5 vtg
        1.3.6 zp
    1.4 生態(tài)毒理試驗(yàn)用魚
    1.5 本研究目的和意義
第二章 稀有鮈鯽 figla、scp3、sox9a 和 zp3 基因 cDNA 全長的克隆與組織分布
    2.1 前言
    2.2 材料與試劑
        2.2.1 主要試驗(yàn)器材
        2.2.2 主要試驗(yàn)試劑
        2.2.3 試驗(yàn)用溶液及配制
        2.2.4 試驗(yàn)材料
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 figla、scp3、sox9a 和 zp3 中間片段的克隆
        2.3.2 RACE 方法克隆 cDNA 末端序列
        2.3.3 測序結(jié)果整理及分析
        2.3.4 qRT-PCR
        2.3.5 數(shù)據(jù)處理及分析
    2.4 結(jié)果分析
        2.4.1 總 RNA 質(zhì)量
        2.4.2 稀有鮈鯽 figla、scp3、sox9a 和 zp3 基因 cDNA 全長的克隆
        2.4.3 稀有鮈鯽 figla、scp3、sox9a 和 zp3 基因 cDNA 全長的分析
        2.4.4 稀有鮈鯽 figla、scp3、sox9a 和 zp3 基因的組織分布
    2.5 討論
        2.5.1 稀有鮈鯽 figla、scp3、sox9a 和 zp3 基因結(jié)構(gòu)與功能
        2.5.2 稀有鮈鯽 figla、scp3、sox9a 和 zp3 基因的組織分布與功能
    2.6 小結(jié)
第三章 EE2 對(duì)稀有鮈鯽 figla、foxl2、scp3、sox9a、vtg、zp2 和 zp3 基因表達(dá)的影響
    3.1 前言
    3.2 材料與試劑
        3.2.1 主要試驗(yàn)器材
        3.2.2 主要試驗(yàn)試劑
        3.2.3 試驗(yàn)材料
        3.2.4 暴露試驗(yàn)
    3.3 試驗(yàn)方法
        3.3.1 總 RNA 提取
        3.3.2 RNA 質(zhì)量和濃度檢測
        3.3.3 cDNA 第一鏈合成
        3.3.4 qRT-PCR
        3.3.5 內(nèi)參基因篩選
        3.3.6 5′側(cè)翼序列的克隆
        3.3.7 數(shù)據(jù)處理及分析
    3.4 結(jié)果分析
        3.4.1 內(nèi)參基因篩選
        3.4.2 EE2 對(duì) figla、foxl2、scp3、sox9a、vtg、zp2 和 zp3 基因表達(dá)影響
        3.4.3 5′側(cè)翼序列分析
    3.5 討論
        3.5.1 EE2 對(duì)稀有鮈鯽 figla 基因表達(dá)的影響
        3.5.2 EE2 對(duì)稀有鮈鯽 foxl2 基因表達(dá)的影響
        3.5.3 EE2 對(duì)稀有鮈鯽 scp3 基因表達(dá)的影響
        3.5.4 EE2 對(duì)稀有鮈鯽 sox9a 基因表達(dá)的影響
        3.5.5 zp 和 vtg 基因?qū)?EE2 不同的響應(yīng)能力
        3.5.6 性腺中 zp2 和 zp3 對(duì) EE2 不同的響應(yīng)能力
    3.6 小結(jié)
結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)和下一步研究計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
附錄
縮略詞
致謝
作者簡介



本文編號(hào)：3844933