大口黑鱸(Micropterus salmoides)俗稱加州鱸,隸屬鱸形目(Perciformes)、太陽(yáng)魚科(Centrarchidae)、黑鱸屬(Micropterus),自然分布于美國(guó)、加拿大等淡水水域,是北美重要的游釣魚類。大口黑鱸于20世紀(jì)80年代引進(jìn)中國(guó),由于其肉質(zhì)鮮嫩且無(wú)肌間刺,廣溫性、生長(zhǎng)快及易捕撈等優(yōu)點(diǎn),已成為我國(guó)重要的淡水養(yǎng)殖品種之一。目前對(duì)于大口黑鱸性別決定與性腺分化發(fā)育機(jī)制了解甚少。Dmrt1基因在多種無(wú)脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物性別決定和分化過(guò)程起著重要的作用,是此過(guò)程一個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄因子,也是目前已知的在魚類中最為保守的一個(gè)與性別決定有關(guān)的基因。本研究基于大口黑鱸轉(zhuǎn)錄譜數(shù)據(jù),展開(kāi)大口黑鱸Dmrt1基因的研究,分析其基因結(jié)構(gòu)與功能、預(yù)測(cè)蛋白結(jié)構(gòu)與功能、了解基因表達(dá)情況以及表達(dá)位置,為深入開(kāi)展其在性別決定與分化中的作用研究奠定基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容如下:1.大口黑鱸Dmrt1基因克隆與序列分析在大口黑鱸基因組三代測(cè)序數(shù)據(jù)和性腺轉(zhuǎn)錄譜數(shù)據(jù)中篩選候選基因Dmrt1,分別獲得51688 bp的Dmrt1 genomic序列和7011 bp的Dmrt1 cDNA序列。根據(jù)此測(cè)序結(jié)果...

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.魚類性別決定與分化機(jī)制
    2.性別分化相關(guān)基因
        2.1 Sox基因家族
        2.2 SF-1 基因
        2.3 Amh基因
        2.4 Dmrt基因家族
    3.Dmrt1 基因在性別決定中作用的研究進(jìn)展
    4.研究目的和意義
第二章 大口黑鱸Dmrt1 基因的克隆與序列分析
    1.材料與儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)用魚
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 引物設(shè)計(jì)
        2.2 大口黑鱸基因組DNA提取與Dmrt1 genomic DNA擴(kuò)增
            2.2.1 大口黑鱸基因組DNA提取
            2.2.2 大口黑鱸Dmrt1 genomic DNA獲得
                2.2.2.1 擴(kuò)增產(chǎn)物回收
                2.2.2.2 回收片段克隆
        2.3 大口黑鱸總RNA提取與Dmrt1 ORF序列的獲取
            2.3.1 總RNA提取
            2.3.2 大口黑鱸ORF序列的擴(kuò)增
                2.3.2.1 反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA
                2.3.2.2 Dmrt1 cDNA序列獲取
                2.3.2.3 Dmrt1 ORF序列獲取
    3.結(jié)果與分析
        3.1 大口黑鱸Dmrt1 genomic DNA序列擴(kuò)增與分析
        3.2 大口黑鱸Dmrt1 ORF序列的擴(kuò)增與分析
            3.2.1 ORF序列分析與聚類分析
            3.2.2 大口黑鱸Dmrt1 蛋白結(jié)構(gòu)分析
                3.2.2.1 Dmrt1 基因ORF框氨基酸組成及親水性分析
                3.2.2.2 大口黑鱸Dmrt1 的亞細(xì)胞定位分析
                3.2.2.3 Dmrt1 蛋白跨膜區(qū)域分析
                3.2.2.4 Dmrt1 蛋白高級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
    4.討論
第三章 大口黑鱸Dmrt1 基因的組織表達(dá)分析
    1.材料與儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)用魚
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.試驗(yàn)方法
        2.1 引物設(shè)計(jì)
        2.2 RNA提取
        2.3 RT-PCR模板的獲得
        2.4 半定量PCR
        2.5 擴(kuò)增片段測(cè)序
        2.6 Real-time PCR
    3.結(jié)果與分析
        3.1 大口黑鱸Dmrt1 基因半定量分析結(jié)果
        3.2 Dmrt1 Real-time PCR
    4.討論
第四章 性腺組織學(xué)觀察與組織原位雜交分析
    1.材料與儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)用魚
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 性腺組織學(xué)觀察
            2.1.1 性腺組織石蠟包埋
            2.1.2 性腺組織學(xué)檢測(cè)
        2.2 原位雜交
            2.2.1 原位雜交探針pGM-T-Dmrt1 的構(gòu)建
            2.2.2 酶切
            2.2.3 體外反轉(zhuǎn)錄
            2.2.4 RNA探針純化
            2.2.5 石蠟切片原位雜交
    3.結(jié)果與分析
        3.1 性腺組織學(xué)觀察
        3.2 性腺原位雜交
    4.討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3837506