甲殼肽(Crustin)是甲殼類動物中一類陽離子的、富含半胱氨酸的、具有抗菌活性的多肽,在其序列的C末端包含一個乳清酸性蛋白(WAP)結(jié)構(gòu)域。甲殼動物中一共有三種類型的甲殼肽(Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型)。他們在抗菌免疫反應(yīng)中有不同的功能。我們在日本囊對蝦Marsupenaeus japonicus)中得到了四種甲殼肽的cDNA序列,把它們命名為MjCrus1、2、3、4。四種crustin的開放閱讀框序列分別為294bp,375bp,333bp,342bp,編碼含有97,124,110,113個氨基酸的蛋白序列。所有的四個甲殼肽均為Ⅰ型甲殼肽。組織分布顯示,MjCrus1、2、3在血細胞和鰓中表達量較高,而MjCrus4則呈現(xiàn)出組成型表達。進一步的表達模式分析顯示,在受到革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌以及白斑綜合征病毒(WSSV)刺激后,四種crustin的表達模式有差別,其中MjCrus1、3、4在細菌刺激后上升較為明顯,而MjCrus2則受病毒刺激誘導(dǎo)。四種甲殼肽用大腸桿菌表達系統(tǒng)進行重組表達,沒有檢測到重組蛋白的抗菌活性。接下來又檢測了重組蛋白對細菌分泌的蛋白酶的抑制活性,發(fā)現(xiàn)除了MjCru...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
第一部分 綜述
    第一章 無脊椎動物先天免疫系統(tǒng)
        1. 模式識別受體
        2. 細胞免疫
            2.1 血細胞的吞噬作用
            2.2 血細胞的結(jié)節(jié)形成和包囊作用
        3. 體液免疫應(yīng)答
            3.1 血淋巴的凝結(jié)作用
            3.2 酚氧化酶原激活系統(tǒng)介導(dǎo)的黑化作用
            3.3 抗菌肽的產(chǎn)生
    第二章 甲殼肽的研究進展
        1. 甲殼肽的結(jié)構(gòu)
        2. 甲殼肽的類型
        3. 甲殼肽功能
            3.1 抗菌功能與蛋白酶抑制劑功能
            3.2 甲殼肽的體內(nèi)功能
    目的意義
    技術(shù)路線
第二部分 日本囊對蟲下四種甲殼肽的功能研宄
    一、前言
    二、材料方法
        1. 材料
            1.1 實驗材料
            1.2 菌株和載體
            1.3 試劑和儀器
        2. 方法
            2.1. 總RNA的提取
            2.2 第一鏈cDNA的合成
            2.3 基因克隆
            2.4 序列比對和進化樹構(gòu)建
            2.5 半定量PCR
            2.6 實時定量PCR
            2.7 重組蛋白的表達
            2.8 重組蛋白純化
            2.9 重組蛋白抑制細菌分泌蛋白酶活性檢測
            2.10 干擾后的細菌清除實驗
            2.11 重組蛋白的細菌結(jié)合實驗
    三、實驗結(jié)果
        3.1 基因克隆和序列分析
        3.2 序列比對和進化樹分析
        3.3 四種甲殼肽的組織分布
        3.4 表達模式分析
        3.5 重組蛋白的表達和純化
        3.6 重組蛋白可以抑制細菌所分泌蛋白酶
        3.7 細菌結(jié)合實驗
        3.8 甲殼肽可以增強對蝦的弧菌清除能力
    四、討論
總結(jié)
參考文獻
致謝
學(xué)位論文評閱及答辯情況表



本文編號：3817720