大黃魚(Pseudosciaena crocea)屬于鱸形目、石首魚科,是我國主要的海洋經(jīng)濟魚類之一。本研究旨在探究SCD1基因與膜流動性的關系并為大黃魚的抗凍性能提高提供一種新思路。為了增強大黃魚(Pseudosciaena crocea)在寒冷條件下的抗凍性,本研究對單一不飽和脂肪酸合成中的一個關鍵性酶——硬脂酰輔酶A去飽和酶(SCD)進行了研究。一下是研究結果:1、對大黃魚SCD家族中的SCD1基因進行了克隆與鑒定(已上傳至Genbank,登陸號:KP731998)。大黃魚SCD1基因全長1388bp,編碼335個氨基酸。與鱸魚(Dicentrarchus labrax)(Genbank登錄號:FN868643.1)的SCD1序列有98%以上的相似性。2、對大黃魚SCD1基因序列進行分析,發(fā)現(xiàn)該基因編碼的蛋白屬于非分泌型蛋白,且該蛋白沒有特定的亞細胞定位,推測其是在細胞質(zhì)中發(fā)揮功能。3、對該基因的表達進行了組織特異性分析,通過半定量RT-PCR的實驗手段表明了SCD1廣泛表達于腦、脾臟、肝臟、腎臟、心臟和肌肉6個組織,其中肝、腎和心臟具有較高的表達量。利用SCD1基因原核表達出來...

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 綜述
    1.1 魚類抗寒的研究
        1.1.1 營養(yǎng)對于魚類抗寒能力的研究
        1.1.2 魚類抗寒的分子生物學研究
    1.2 SCD基因家族的研究進展
        1.2.1 SCD基因的發(fā)現(xiàn)與表達分布
        1.2.2 SCD基因的功能
        1.2.3 SCD基因的調(diào)節(jié)
    1.3 細胞膜流動性的研究
        1.3.0 細胞膜流動性的研究手段
        1.3.1 細胞膜流動性的影響因素
        1.3.2 本研究的內(nèi)容、目的及意義
第二章 大黃魚（Pseudosciaena crocea）硬脂酰-輔酶A脫氫酶 Ⅰ（SCD1）基因的克隆與序列分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗儀器和試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 SCD1基因的本地blast與序列預測
        2.2.2 大黃魚各組織總RNA的提取與逆轉(zhuǎn)錄總RNA
        2.2.3 大黃魚SCD1基因的克隆與鑒定
        2.2.4 大黃魚SCD1基因序列分析
    2.3 實驗結果
        2.3.1 大黃魚SCD1基因的克隆與鑒定
        2.3.2 大黃魚SCD1基因序列分析
第三章 大黃魚（Pseudosciaena crocea）SCD1基因表達模式的研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗儀器和試劑
        3.1.3 實驗試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 大黃魚SCD1基因組織特異性檢測
        3.2.2 原核表達質(zhì)粒的構建
        3.2.3 原核表達小規(guī)模誘導
        3.2.4 原核表達大規(guī)模誘導
        3.2.5 聚丙烯膠凝膠電泳檢測原核表達產(chǎn)物
        3.2.6 蛋白純化
        3.2.7 多克隆抗體制備
        3.2.8 免疫組織化學
        3.2.9 真核表達質(zhì)粒構建
        3.2.10 Western blot分析
        3.2.11凍存細胞的復蘇、培養(yǎng)與傳代
        3.2.12凍存細胞的培養(yǎng)與傳代
    3.3 實驗結果與分析
        3.3.1 大黃魚SCD1基因組織特異性檢測
        3.3.2 大黃魚SCD1原核蛋白表達
        3.3.3 大黃魚SCD1抗體的Western blot分析
        3.3.4 大黃魚SCD1基因真核表達
    3.4 討論
第四章 大黃魚（Pseudosciaena crocea）SCD1基因?qū)τ谀ち鲃有缘挠绊?br>    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗儀器與試劑
    4.2 實驗方法
        4.2.1 光漂白熒光恢復實驗(FRAP)
        4.2.2 實驗數(shù)據(jù)處理
    4.3 實驗結果
        4.3.1 光漂白熒光恢復實驗結果
        4.3.2 最佳溫度下細胞膜流動性情況
        4.3.3 溫度梯度下細胞膜流動性變化情況
    4.4 討論
參考文獻
致謝
在讀期間發(fā)表的學術論文及研究成果



本文編號：3815360