大黃魚(Pseudosciaena crocea)屬于鱸形目、石首魚科,是我國主要的海洋經(jīng)濟(jì)魚類之一。本研究旨在探究SCD1基因與膜流動(dòng)性的關(guān)系并為大黃魚的抗凍性能提高提供一種新思路。為了增強(qiáng)大黃魚(Pseudosciaena crocea)在寒冷條件下的抗凍性,本研究對(duì)單一不飽和脂肪酸合成中的一個(gè)關(guān)鍵性酶——硬脂酰輔酶A去飽和酶(SCD)進(jìn)行了研究。一下是研究結(jié)果:1、對(duì)大黃魚SCD家族中的SCD1基因進(jìn)行了克隆與鑒定(已上傳至Genbank,登陸號(hào):KP731998)。大黃魚SCD1基因全長1388bp,編碼335個(gè)氨基酸。與鱸魚(Dicentrarchus labrax)(Genbank登錄號(hào):FN868643.1)的SCD1序列有98%以上的相似性。2、對(duì)大黃魚SCD1基因序列進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)該基因編碼的蛋白屬于非分泌型蛋白,且該蛋白沒有特定的亞細(xì)胞定位,推測(cè)其是在細(xì)胞質(zhì)中發(fā)揮功能。3、對(duì)該基因的表達(dá)進(jìn)行了組織特異性分析,通過半定量RT-PCR的實(shí)驗(yàn)手段表明了SCD1廣泛表達(dá)于腦、脾臟、肝臟、腎臟、心臟和肌肉6個(gè)組織,其中肝、腎和心臟具有較高的表達(dá)量。利用SCD1基因原核表達(dá)出來...

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 綜述
    1.1 魚類抗寒的研究
        1.1.1 營養(yǎng)對(duì)于魚類抗寒能力的研究
        1.1.2 魚類抗寒的分子生物學(xué)研究
    1.2 SCD基因家族的研究進(jìn)展
        1.2.1 SCD基因的發(fā)現(xiàn)與表達(dá)分布
        1.2.2 SCD基因的功能
        1.2.3 SCD基因的調(diào)節(jié)
    1.3 細(xì)胞膜流動(dòng)性的研究
        1.3.0 細(xì)胞膜流動(dòng)性的研究手段
        1.3.1 細(xì)胞膜流動(dòng)性的影響因素
        1.3.2 本研究的內(nèi)容、目的及意義
第二章 大黃魚（Pseudosciaena crocea）硬脂酰-輔酶A脫氫酶 Ⅰ（SCD1）基因的克隆與序列分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 SCD1基因的本地blast與序列預(yù)測(cè)
        2.2.2 大黃魚各組織總RNA的提取與逆轉(zhuǎn)錄總RNA
        2.2.3 大黃魚SCD1基因的克隆與鑒定
        2.2.4 大黃魚SCD1基因序列分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 大黃魚SCD1基因的克隆與鑒定
        2.3.2 大黃魚SCD1基因序列分析
第三章 大黃魚（Pseudosciaena crocea）SCD1基因表達(dá)模式的研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 大黃魚SCD1基因組織特異性檢測(cè)
        3.2.2 原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.2.3 原核表達(dá)小規(guī)模誘導(dǎo)
        3.2.4 原核表達(dá)大規(guī)模誘導(dǎo)
        3.2.5 聚丙烯膠凝膠電泳檢測(cè)原核表達(dá)產(chǎn)物
        3.2.6 蛋白純化
        3.2.7 多克隆抗體制備
        3.2.8 免疫組織化學(xué)
        3.2.9 真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建
        3.2.10 Western blot分析
        3.2.11凍存細(xì)胞的復(fù)蘇、培養(yǎng)與傳代
        3.2.12凍存細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3.1 大黃魚SCD1基因組織特異性檢測(cè)
        3.3.2 大黃魚SCD1原核蛋白表達(dá)
        3.3.3 大黃魚SCD1抗體的Western blot分析
        3.3.4 大黃魚SCD1基因真核表達(dá)
    3.4 討論
第四章 大黃魚（Pseudosciaena crocea）SCD1基因?qū)τ谀ち鲃?dòng)性的影響
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 光漂白熒光恢復(fù)實(shí)驗(yàn)(FRAP)
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 光漂白熒光恢復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.2 最佳溫度下細(xì)胞膜流動(dòng)性情況
        4.3.3 溫度梯度下細(xì)胞膜流動(dòng)性變化情況
    4.4 討論
參考文獻(xiàn)
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果



本文編號(hào)：3815360