天然免疫又被稱之為非特異性免疫,指個(gè)體與生具有的、作用范圍廣、不針對特定抗原的免疫能力。天然免疫是一種包含大量模式識別受體(PRR)的高度復(fù)雜的快速誘導(dǎo)免疫反應(yīng),這些模式識別受體識別各種病原體相關(guān)分子模式(Pathogen Associated Molecular Patterns,PAMPs),并通過各個(gè)不同的信號通路激活機(jī)體的免疫應(yīng)答。 IKKε(inhibitor of NF-kB kinase ε)是天然免疫系統(tǒng)中Toll-Like信號通路以及NF-kB (nuclear factor-kappa B)信號通路中的一種激酶,它是最新發(fā)現(xiàn)的IκB激酶家族(IkB kinase,IKKs)的成員,最初被認(rèn)定為脂多糖誘導(dǎo)的絲氨酸/蘇氨酸激酶。IKKε在信號分子的作用下磷酸化IkBα來誘導(dǎo)激活NF-kB,或者與TBK1(TANK-binding kinase1)在支架蛋白的作用下磷酸化IRF3(interferon regulatory factor3)與IRF7(interferon regulatory factor7)激酶,從而誘導(dǎo)IFN的分泌。 天然免疫是魚類等低等脊椎動(dòng)物的防...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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中文摘要
ABSTRACT
目錄
第一章 前言
    1.1 魚類免疫研究
    1.2 IKKε與天然免疫
        1.2.1 NF-κB與IκB
        1.2.2 IKKε的研究進(jìn)展
    1.3 青魚、草魚及多倍體魚
        1.3.1 青魚和草魚
        1.3.2 多倍體
第二章 青魚草魚以及多倍體魚IKKε基因的克隆
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 儀器與試劑
    2.2 青魚IKKε基因cDNA編碼閱讀框的克隆
        2.2.1 青魚脾臟以及多倍體魚細(xì)胞RNA的提取—Trizol法
        2.2.2 cDNA第一條鏈的合成
        2.2.3 引物設(shè)計(jì)及合成
        2.2.4 PCR擴(kuò)增
        2.2.5 瓊脂糖凝膠電泳檢測
        2.2.6 PCR產(chǎn)物的回收
        2.2.7 PCR回收產(chǎn)物平滑末端加A尾
        2.2.8 連接反應(yīng)
        2.2.9 采用熱激法轉(zhuǎn)化大腸桿菌TOP10感受態(tài)細(xì)胞
        2.2.10 陽性克隆的篩選
        2.2.11 測序鑒定
    2.3 青魚IKKE基因cDNA全長的擴(kuò)增
        2.3.1 多倍體魚細(xì)胞以及青魚草魚脾臟RNA的提取—Trizol法
        2.3.2 多倍體魚細(xì)胞以及青魚脾臟cDNA的制備
        2.3.3 5’RACE的PCR擴(kuò)增
        2.3.4 3’RACE的PCR擴(kuò)增
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 總RNA提取結(jié)果
        2.4.2 青魚草魚IKKε基因cDNA序列信息
        2.4.3 青魚草魚IKKε基因的進(jìn)化樹分析
    2.5 討論
第三章 青魚IKKε基因的表達(dá)
    3.1 材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 儀器,試劑與配置
    3.2 方法
        3.2.1 免疫印記檢測(western blotting)
        3.2.2 免疫共聚焦(confocal)
        3.2.3 青魚IKKε基因開放閱讀框的克隆
        3.2.4 構(gòu)建pcDNA5-FRT/TO-FLAG-BC-ikk與pcDNA5-FRT/TO-BC-ikk-FLAG表達(dá)載體
        3.2.5 青魚IKKε基因在HEK293T細(xì)胞中的表達(dá)
        3.2.6 青魚IKKε基因構(gòu)建慢病毒載體
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 構(gòu)建pcDNA5-FRT/TO-FLAG-BC-ikk與pcDNA5-FRT/TO-BC-ikk-FLAG表達(dá)載體
        3.3.2 青魚IKKε基因在HEK293T細(xì)胞中的表達(dá)
        3.3.3 青魚IKKε基因的免疫熒光
        3.3.4 構(gòu)建青魚IKKε基因的慢病毒載體
    3.4 討論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號：3812292