磷是維持動(dòng)物體內(nèi)各項(xiàng)生理活動(dòng)正常進(jìn)行的必需礦質(zhì)元素之一,水產(chǎn)飼料中磷的大量添加和低利用率會(huì)造成磷資源浪費(fèi)以及水體環(huán)境的惡化。從分子水平上了解水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)磷代謝的機(jī)理,可以避免魚(yú)類(lèi)因?yàn)榱兹狈Χ鴮?dǎo)致的疾病的同時(shí)又能控制水體環(huán)境,防止水體富營(yíng)養(yǎng)化。已知NaPi-Ⅱ型蛋白協(xié)調(diào)動(dòng)物體內(nèi)磷元素的動(dòng)態(tài)平衡,腸道和腎臟通過(guò)NaPi-II型蛋白完成磷的吸收,故對(duì)NaPi-II型蛋白基因在分子生物學(xué)上的研究對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)有指導(dǎo)意義。 本研究根據(jù)Genbank已知鯉科魚(yú)類(lèi)斑馬魚(yú)(Danio rerio)的NaPi-IIb基因序列設(shè)計(jì)引物,采用RT-PCR方法和RACE技術(shù)克隆出鯉(Cyprinus carpio)的NaPi-IIb基因cDNA全序列,所得序列經(jīng)過(guò)拼接后進(jìn)行序列的分析。利用Real-time PCR技術(shù)研究了鯉胚胎發(fā)育過(guò)程中和鯉不同組織中NaPi-Ⅱb mRNA表達(dá)量差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： (1)獲得鯉NaPi-IIb基因2594bp的完整cDNA序列,包括1491bp的完全CDS區(qū),編碼496個(gè)氨基酸,完全5’-UTR (448bp)和3’-UTR (655bp)和一個(gè)polyA尾巴。所得序列已...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 磷的來(lái)源與特點(diǎn)
    1.2 磷的吸收方式與轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)理
    1.3 鈉磷轉(zhuǎn)運(yùn)載體蛋白的種類(lèi)及組織分布
    1.4 NaPi-Ⅱ型轉(zhuǎn)運(yùn)載體蛋白的結(jié)構(gòu)
    1.5 影響NaPi-Ⅱb蛋白對(duì)磷轉(zhuǎn)運(yùn)的因素
        1.5.1 日糧磷含量
        1.5.2 鈣磷含量與鈣磷比
        1.5.3 維生素D
        1.5.4 pH值
        1.5.5 激素
        1.5.6 日齡
    1.6 研究磷吸收轉(zhuǎn)運(yùn)的技術(shù)與方法
    1.7 水產(chǎn)動(dòng)物NaPi-Ⅱb蛋白的研究進(jìn)展
    1.8 本實(shí)驗(yàn)的研究?jī)?nèi)容以及目的與意義
        1.8.1 論文研究?jī)?nèi)容
        1.8.2 研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 樣本采集
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
        2.2.1 主要儀器設(shè)備
        2.2.2 主要藥品和試劑
        2.2.3 試劑盒及工具酶
        2.2.4 運(yùn)用的生物學(xué)軟件
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 鯉組織RNA的提取與檢測(cè)
        2.3.2 鯉NaPi-Ⅱb基因的克隆
        2.3.3 鯉不同組織NaPi-Ⅱb基因mRNA的含量表達(dá)
        2.3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 組織總RNA提取結(jié)果
    3.2 鯉NaPi-Ⅱb基因的克隆與測(cè)序
        3.2.1 鯉NaPi-Ⅱb基因的cDNA克隆
        3.2.2 鯉NaPi-Ⅱb基因序列的分析
        3.2.3 NaPi-Ⅱb基因編碼蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)分析
        3.2.4 NaPi-Ⅱb基因編碼蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析
        3.2.5 NaPi-Ⅱb基因編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域及功能基序的分析
        3.2.6 鯉NaPi-Ⅱb基因的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)及親緣關(guān)系分析
    3.3 鯉NaPi-Ⅱb基因在各組織中的Real-Time PCR檢測(cè)
        3.3.1 鯉魚(yú)卵中NaPi-Ⅱb基因的表達(dá)分析
        3.3.2 鯉各個(gè)組織中NaPi-Ⅱb基因的表達(dá)分析
4 討論
    4.1 鯉NaPi-Ⅱb基因的克隆、序列分析
        4.1.1 鯉NaPi-Ⅱb基因的克隆
        4.1.2 鯉NaPi-Ⅱb基因的同源性及進(jìn)化分析
    4.2 鯉NaPi-Ⅱb基因在組織中的表達(dá)差異
        4.2.1 鯉NaPi-Ⅱb基因在胚胎不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)差異
        4.2.2 鯉NaPi-Ⅱb基因在組織中的表達(dá)差異
    4.3 研究展望
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號(hào)：3772448