近年來,鯉瘡疹病毒2型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV2)感染的流行對我國異育銀鯽的養(yǎng)殖造成了嚴重的經(jīng)濟損失。該病原在中國大陸部分省市地區(qū)引起的疫情已受到越來越多的關(guān)注,特別是在江蘇省主要水產(chǎn)養(yǎng)殖地區(qū)。此外,其它細菌性病原,特別是嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)也引起鯽魚的出血性敗血癥。2015年,南京地區(qū)的部分異育銀鯽飼養(yǎng)塘口相繼出現(xiàn)了出血性敗血癥疫情。本試驗采集病料42份,首先分離純化細菌,基于氣單胞菌DNA促旋酶B亞單位(gyrB)基因序列設(shè)計引物,PCR擴增后測序,進行細菌性病原的檢測;同時,提取各病料樣本基因組,PCR擴增CyHV2解旋酶(hel)基因,進行病毒性病原的鑒定。結(jié)果表明,28份檢測樣本有氣單胞菌感染,其中6份為維氏氣單胞菌(A.veronii),11份為簡達氣單胞菌(A.jandaei),3份為溫和氣單胞菌(A.sobria),8份為嗜水氣單胞菌(A.hydrophila)。在42份病料中,34份為CyHV2陽性,其中在30份病死鯽魚樣本中,26份為CyHV2陽性;在12份臨床健康魚樣本中,8份為CyHV2陽性,陽...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文獻綜述
    第一章 鯉皰疹病毒2型的研究進展
        1 病原學(xué)
            1.1 病毒分類地位
            1.2 病毒基因組結(jié)構(gòu)
            1.3 病毒的分離培養(yǎng)
        2 流行病學(xué)
            2.1 病原分布
            2.2 宿主與傳播途徑
            2.3 臨床癥狀與組織病變
        3 鯉疙疹病毒2型感染的免疫學(xué)研究
            3.1 滅活疫苗
            3.2 亞單位疫苗
            3.3 鯉魚抗CyHV2感染的免疫應(yīng)答基因
        4 小結(jié)
        參考文獻
第二篇 試驗研究
    第二章 南京地區(qū)異育銀鯽出血性敗血癥病原的檢測
        1 材料
            1.1 病魚
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
        2 方法
            2.1 病史調(diào)查
            2.2 水質(zhì)監(jiān)測
            2.3 分子生物學(xué)檢測
            2.4 斑馬魚致病性實驗
            2.5 多位點序列分型
        3 結(jié)果
            3.1 病史調(diào)查
            3.2 水質(zhì)檢測
            3.3 臨床癥狀
            3.4 分子生物學(xué)檢測
            3.5 斑馬魚致病性試驗
            3.7 多位點序列分型
        4 討論
        參考文獻
    第三章 CYHV2病原純化及ORF30基因的克隆表達
        1 材料
            1.1 病料、載體、菌株
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 實驗動物
        2 方法
            2.1 病料處理
            2.2 差速離心
            2.3 蔗糖濃度梯度離心
            2.4 病毒粒子的電鏡觀察
            2.5 ORF30基因的引物設(shè)計與合成
            2.6 病毒核酸的提取
            2.7     ORF30基因的擴增及瓊脂糖凝膠電泳檢測
            2.8 PCR產(chǎn)物的回收
            2.9 目的基因與pET32a的連接與轉(zhuǎn)化
            2.10 重組質(zhì)粒pET32a-ORF30克隆菌的篩選與鑒定
            2.11 重組質(zhì)粒pET32a-ORF30誘導(dǎo)條件的優(yōu)化
            2.12 SDS-PAGE鑒定
            2.13 pET32a-ORF30融合蛋白的大量表達
            2.14 上清蛋白的純化
            2.15 實驗動物的免疫接種
            2.16 采血、分離血清及多克隆抗體效價的測定
            2.17 Western blot鑒定
        3 結(jié)果
            3.1 病毒純化
            3.2 ORF30基因的PCR擴增
            3.3 ORF30基因克隆質(zhì)粒的鑒定
            3.4 重組質(zhì)粒pET32a-ORF30誘導(dǎo)條件的優(yōu)化
            3.5 重組質(zhì)粒大量表達的上清蛋白純化
            3.6 多克隆抗體效價的測定
            3.7 Western blot鑒定
        4 討論
        參考文獻
全文總結(jié)
致謝



本文編號：3757433