發(fā)布時(shí)間：2023-03-06 19:47

　　中華烏塘鱧(Bostrychus sinensis)是我國福建、廣東、廣西等地區(qū)重要的海水經(jīng)濟(jì)魚類,隨著集約式養(yǎng)殖的密度增大,中華烏塘鱧養(yǎng)殖場病害頻發(fā),中華烏塘鱧養(yǎng)殖業(yè)也因此遭受了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。魚類抵御微生物病原體的第一道有效防線是先天免疫系統(tǒng),它可以通過一系列的模式識別受體(PRR)特異性的識別微生物病原體一系列不同的特征分子“病原體相關(guān)分子模式”(PAMPs),并誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞因子和I型干擾素等的釋放,應(yīng)對微生物病原體的攻擊。Toll樣受體(TLR)是一類至關(guān)重要的PRR,屬于Ⅰ型跨膜受體。為深入了解中華烏塘鱧的免疫系統(tǒng)以及TLR信號通路的作用機(jī)制,本研究克隆了中華烏塘鱧TLR信號通路中的五個(gè)重要基因:TLR1(BsTLR1)、TLR2(BsTLR2)、TLR5(BsTLR5)、MyD88(BsMyD88)及TIRAP(BsTIRAP),并對這些基因進(jìn)行了生物信息學(xué)的分析。為進(jìn)一步了解這些基因在先天免疫中的作用,通過實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)分析了其在健康魚體組織中的表達(dá)模式,以及在副溶血弧菌和Poly I:C刺激后的表達(dá)模式。具體研究結(jié)果如下:(1)BsTLR1、BsTLR2、BsTLR5...

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 TLRs研究進(jìn)展綜述
        1.1.1 Toll樣受體的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 Toll樣受體的分類
        1.1.3 TLRs介導(dǎo)的免疫信號通路
    1.2 中華烏塘鱧簡介
    1.3 研究目的及意義
第二章 TLR信號通路五個(gè)功能基因的克隆及序列分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)器材
        2.1.3 主要試劑與溶液配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組織獲取
        2.2.2 總RNA提取
        2.2.3 cDNA合成
        2.2.4 五個(gè)基因的全長克隆
        2.2.5 五個(gè)基因的生物信息學(xué)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 TLR信號通路五個(gè)功能基因的序列特征
        2.3.2 同源性分析
        2.3.3 進(jìn)化關(guān)系分析
        2.3.4 蛋白結(jié)構(gòu)域比較
        2.3.5 不同脊椎動(dòng)物TLR信號通路五個(gè)功能基因的序列比對
    2.4 討論
第三章 健康魚體五個(gè)功能基因的組織表達(dá)模式
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 健康魚體各組織c DNA定量模板的獲取
        3.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4 討論
第四章 副溶血弧菌和Poly I:C刺激下五個(gè)基因的組織表達(dá)模式
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)用魚及細(xì)菌
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)菌培養(yǎng)
        4.2.2 細(xì)菌及Poly I:C懸液制備
        4.2.3 細(xì)菌及Poly I:C刺激實(shí)驗(yàn)
        4.2.4 總RNA提取及模板制備
        4.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量反應(yīng)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 Bs TLR1 在外源物刺激后的差異表達(dá)
        4.3.2 Bs TLR2 在外源物刺激后的差異表達(dá)
        4.3.3 Bs TLR5 在外源物刺激后的差異表達(dá)
        4.3.4 Bs My D88 在外源物刺激后的差異表達(dá)
        4.3.5 Bs TIRAP在外源物刺激后的差異表達(dá)
    4.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果



本文編號：3757271