草魚(Ctenopharyngodon idellus)為我國淡水魚類養(yǎng)殖的主要品種之一，2012年全國漁業(yè)統(tǒng)計年鑒顯示，我國淡水魚類養(yǎng)殖產(chǎn)量為2334.11萬噸，其中草魚的養(yǎng)殖產(chǎn)量達478.17萬噸，為我國所有養(yǎng)殖魚類之首。而草魚出血病的頻繁爆發(fā)給我國草魚養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大經(jīng)濟損失，嚴重危害我國淡水養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。草魚呼腸孤病毒(grasscarp reovirus,GCRV)是致使草魚出血病爆發(fā)的主要病原，是中國大陸分離的第一株魚類病毒，也是目前毒力最強的水生呼腸孤病毒之一。GCRV的基因組為分11個節(jié)段的dsRNA，變異性較強，目前已有40多株分離株得到鑒定。根據(jù)VP6基因序列比較，GCRV分離株至少存在3種基因型，代表株分別為Ⅰ型GCRV873、Ⅱ型GCRV HZ08和Ⅲ型GCRV104(HGDRV)，但不同基因型毒株在同等條件下形態(tài)、基因組帶型、致細胞病變、同種細胞和魚體中增殖情況等生物學特性未見系統(tǒng)的比較和分析。本研究根據(jù)VP4編碼蛋白的基因序列對目前已有的毒株構建系統(tǒng)進化樹進行分子分型，并結合本實驗室保存的毒株進行基因組帶型分析，篩選了來自三個不同基因型的GCRV。根據(jù)不...

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【學位級別】：碩士

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摘要
ABSTRACT
目錄
第一章 前言
    1 草魚呼腸孤病毒研究進展
        1.1 草魚呼腸孤病毒的生物學特性
        1.2 草魚呼腸孤病毒的基因組研究
        1.3 草魚呼腸孤病毒的基因型問題
        1.4 草魚呼腸孤病毒檢測技術的建立
        1.5 草魚出血病的防控
    2 本研究目的和意義
第二章 草魚呼腸孤病毒的基因分型及不同基因型 GCRV熒光定量檢測方法的建立
    1 材料與方法
        1.1 細胞與病原
        1.2 主要試劑和儀器
        1.3 病毒基因組 SDS-PAGE 電泳
        1.4 系統(tǒng)進化樹的構建
        1.5 引物的設計與合成
        1.6 標準質粒的制備
        1.7 標準曲線構建與靈敏度試驗
        1.8 特異性與重復性試驗
        1.9 臨床應用
    2 結果
        2.1 病毒基因分型結果
        2.2 熒光定量檢測方法的建立和應用
    3 討論
第三章 三株不同基因型草魚呼腸孤病毒的生物學特性比較
    1 材料與方法
        1.1 試驗材料與病原
        1.2 主要試劑與儀器
        1.3 電鏡樣品的制備
        1.4 pH 對不同基因型 GCRV 穩(wěn)定性影響
        1.5 乙醚與胰蛋白酶對不同基因型 GCRV 穩(wěn)定性影響
        1.6 凍融對不同基因型 GCRV 穩(wěn)定性影響
        1.7 細胞增殖試驗
        1.8 魚體感染試驗
        1.9 不同基因型 GCRV 間免疫交叉保護性試驗
    2 結果
        2.1 形態(tài)學觀察
        2.2 理化特性
        2.3 不同基因型 GCRV 的細胞增殖特性差異
        2.4 不同基因型 GCRV 在稀有鮈鯽中增殖差異
        2.5 不同基因型病毒間免疫交叉保護率
    3 討論
全文總結
參考文獻
附錄
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文
致謝



本文編號：3745434