發(fā)布時(shí)間：2023-02-09 08:33

　　分離和篩選動(dòng)物腸道芽孢桿菌,精準(zhǔn)開發(fā)特異性的腸道益生菌,能夠更有效促進(jìn)腸道認(rèn)知,使其在動(dòng)物腸道環(huán)境中迅速生長(zhǎng)和形成菌落,維護(hù)腸道微生物區(qū)系與宿主平衡,大大提高飼料利用率,具有顯著的經(jīng)濟(jì)和生態(tài)效益。本研究從野生大黃魚腸道中分離、鑒定了一株芽孢桿菌,并對(duì)其培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基進(jìn)行了優(yōu)化,最后,探討了以不同食用菌菌糠為發(fā)酵底物的發(fā)酵培養(yǎng)腸道芽孢桿菌的可行性。具體研究結(jié)果如下:本文采用腸液梯度稀釋法,從健康的大黃魚腸道中,首先分離出一株芽孢桿菌LYC-1;結(jié)合菌落及顯微形態(tài)和基于16SrDNA的序列分析對(duì)其進(jìn)行鑒定;利用水解圈的方法對(duì)該菌株產(chǎn)蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶及超氧化物歧化酶(SOD)的定性分析;探討了該菌株對(duì)人工腸、胃液耐受性和滲透壓耐受性。結(jié)果顯示:該菌株與Bacillu(屬)簇集在一起,結(jié)合形態(tài)特征,確認(rèn)LYC-1屬于芽孢桿菌屬。產(chǎn)酶分析顯示,該菌株具有蛋白酶、淀粉酶及SOD的分泌能力。而且,能夠耐受腸胃液及高濃度的滲透壓。采用單因素試驗(yàn)研究了適合LYC-1產(chǎn)蛋白酶的碳氮源、無機(jī)鹽和發(fā)酵條件。用Placke-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)、.最陡爬坡試驗(yàn)及響應(yīng)面中的Box-Behnken法確定液...

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中文文摘
第一章 緒論
    1.1 大黃魚的簡(jiǎn)介
    1.2 微生物添加劑
        1.2.1 微生物添加劑的定義
        1.2.2 微生物添加劑的作用機(jī)理
            1.2.2.1 調(diào)整和保持微生態(tài)平衡理論
            1.2.2.2 微生物的奪氧理論
            1.2.2.3 生物拮抗理論
            1.2.2.4 微生物屏障理論
            1.2.2.5 增強(qiáng)機(jī)體免疫理論
            1.2.2.6 減少有害物質(zhì)及促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)合成理論
        1.2.3 微生物添加劑的應(yīng)用
        1.2.4 微生物添加劑的分類
            1.2.4.1 光合細(xì)菌
            1.2.4.2 芽孢桿菌
            1.2.4.3 乳酸菌
            1.2.4.4 硝化細(xì)菌
            1.2.4.5 酵母菌
            1.2.4.6 蛭弧菌
            1.2.4.7 EM菌(Effective Microorganisms)
        1.2.5 微生物添加劑的發(fā)展?fàn)顩r和發(fā)展趨勢(shì)
    1.3 食用菌菌糠
        1.3.1 食用菌菌糠的定義
        1.3.2 食用菌菌糠的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值
        1.3.3 食用菌菌糠的高效利用
        1.3.4 食用菌糠的發(fā)展前景
    1.4 本課題的選題依據(jù)以及研究?jī)?nèi)容
第二章 腸道芽孢桿菌的分離、鑒定及生物學(xué)特性的研究
    2.1 前言
    2.2 材料
        2.2.1 主要儀器
        2.2.2 主要試劑
        2.2.3 主要培養(yǎng)基與溶液配制
    2.3 方法
        2.3.1 樣品采集
        2.3.2 芽孢桿菌的分離
        2.3.3 芽孢桿菌菌懸液的制備
        2.3.4 美藍(lán)染色和革蘭氏染色
        2.3.5 芽孢桿菌的16S rDNA分子鑒定
            2.3.5.1 芽孢桿菌的基因組DNA提取
            2.3.5.2 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增16S rDNA
            2.3.5.3 1%瓊脂凝膠電泳
            2.3.5.4 目的DNA的連接與轉(zhuǎn)化
            2.3.5.5 菌落PCR驗(yàn)證
            2.3.5.6 保種測(cè)序
        2.3.6 芽孢桿菌的生物學(xué)特性分析
            2.3.6.1 產(chǎn)酶酶活的初篩測(cè)定——水解圈法
            2.3.6.2 SOD酶活的測(cè)定——鄰苯三酚自氧化法
            2.3.6.3 人工腸液耐受性測(cè)定
            2.3.6.4 人工胃液耐受性測(cè)定
            2.3.6.5 滲透壓耐受性測(cè)定
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 芽孢桿菌的分離
        2.4.2 美藍(lán)染色和革蘭氏染色
        2.4.3 芽孢桿菌的16S rDNA分子鑒定
            2.4.3.1 基因組DNA提取
            2.4.3.2 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增16S rDNA
            2.4.3.3 割膠回收及擴(kuò)增產(chǎn)物的純化
            2.4.3.4 菌落PCR驗(yàn)證
            2.4.3.5 16S rDNA基因序列測(cè)序結(jié)果與進(jìn)化樹的構(gòu)建分析
        2.4.4 LYC-1的生物學(xué)特性分析
            2.4.4.1 蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶的產(chǎn)酶特性
            2.4.4.2 SOD酶的產(chǎn)酶特性
            2.4.4.3 LYC-1菌株人工腸液耐受性研究
            2.4.4.4 LYC-1菌株人工胃液耐受性研究
            2.4.4.5 LYC-1菌株滲透壓耐受性研究
    2.5 小結(jié)
第三章 芽孢桿菌LYC-1菌株發(fā)酵培養(yǎng)條件的研究
    3.1 前言
    3.2 材料
        3.2.1 菌種
        3.2.2 主要儀器
        3.2.3 主要試劑和溶液配制
    3.3 方法
        3.3.1 蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定
        3.3.2 樣液蛋白酶的測(cè)定
        3.3.3 樣液的制備
        3.3.4 LYC-1菌株搖瓶發(fā)酵
            3.3.4.1 碳源對(duì)LYC-1產(chǎn)蛋白酶活的影響
            3.3.4.2 氮源對(duì)LYC-1產(chǎn)蛋白酶活的影響
            3.3.4.3 無機(jī)鹽對(duì)LYC-1產(chǎn)蛋白酶活的影響
            3.3.4.4 發(fā)酵條件對(duì)LYC-1產(chǎn)蛋白酶的影響
            3.3.4.5 Placke-Burman設(shè)計(jì)篩選主要影響因素
            3.3.4.6 最陡爬坡試驗(yàn)
            3.3.4.7 Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化
        3.3.5 LYC-1菌株發(fā)酵罐發(fā)酵研究
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3.4.2 LYC-1菌株搖瓶發(fā)酵
            3.4.2.1 液體基質(zhì)的篩選
                3.4.2.1.1 碳源對(duì)LYC-1產(chǎn)蛋白酶活的影響
                3.4.2.1.2 最適碳源濃度的確定
                3.4.2.1.3 氮源對(duì)LYC-1產(chǎn)蛋白酶活的影響
                3.4.2.1.4 最適氮源濃度的確定
                3.4.2.1.5 無機(jī)鹽對(duì)LYC-1產(chǎn)蛋白酶活的影響
            3.4.2.2 發(fā)酵條件對(duì)LYC-1產(chǎn)蛋白酶的影響
                3.4.2.2.1 初始pH的優(yōu)化
                3.4.2.2.2 發(fā)酵溫度的優(yōu)化
                3.4.2.2.3 轉(zhuǎn)速的優(yōu)化
                3.4.2.2.4 搖瓶裝液量的優(yōu)化
            3.4.2.3 Placke-Burman設(shè)計(jì)篩選主要影響因素
            3.4.2.4 最陡爬坡試驗(yàn)
            3.4.2.5 Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化
            3.4.2.6 模型驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
        3.4.3 發(fā)酵罐發(fā)酵周期對(duì)蛋白酶活的影響
    3.5 小結(jié)
第四章 芽孢桿菌LYC-1菌株菌糠發(fā)酵制備飼料添加劑的研究
    4.1 前言
    4.2 材料
        4.2.1 菌種和菌糠
        4.2.2 主要試劑和培養(yǎng)基配制
        4.2.3 主要儀器
    4.3 方法
        4.3.1 菌糠的處理方法
        4.3.2 檢測(cè)芽孢數(shù)的方法
        4.3.3 種子液的制備
        4.3.4 接種與培養(yǎng)
        4.3.5 基礎(chǔ)培養(yǎng)基的確定
        4.3.6 單因素試驗(yàn)
            4.3.6.1 玉米粉不同添加量對(duì)LYC-1芽孢數(shù)的影響
            4.3.6.2 豆粕粉不同添加量對(duì)LYC-1芽孢數(shù)的影響
            4.3.6.3 麩皮不同添加量對(duì)LYC-1芽孢數(shù)的影響
            4.3.6.4 磷酸二氫鉀不同添加量對(duì)LYC-1芽孢數(shù)的影響
            4.3.6.5 碳酸鈣不同添加量對(duì)LYC-1芽孢數(shù)的影響
        4.3.7 菌糠固體發(fā)酵正交試驗(yàn)
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 三種菌糠發(fā)酵的結(jié)果與分析
        4.4.2 單因素實(shí)驗(yàn)
            4.4.2.1 玉米粉不同添加量對(duì)LYC-1芽孢數(shù)的影響
            4.4.2.2 豆粕粉不同添加量對(duì)LYC-1芽孢數(shù)的影響
            4.4.2.3 麩皮不同添加量對(duì)LYC-1芽孢數(shù)的影響
            4.4.2.4 磷酸二氫鉀不同添加量對(duì)LYC-1芽孢數(shù)的影響
            4.4.2.5 碳酸鈣不同添加量對(duì)LYC-1芽孢數(shù)的影響
        4.4.3 金針菇菌糠發(fā)酵培養(yǎng)基的正交試驗(yàn)研究
    4.5 小結(jié)
第五章 總結(jié)與展望
    5.1 總結(jié)
        5.1.1 腸道芽孢桿菌的分離、鑒定及生物學(xué)特性的研究
        5.1.2 芽孢桿菌LYC-1菌株液體發(fā)酵工藝
        5.1.3 芽孢桿菌LYC-1菌糠發(fā)酵培養(yǎng)的研究
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間承擔(dān)的科研任務(wù)與主要成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3738571