發(fā)布時間：2023-01-05 11:19

　　中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）隸屬節(jié)肢動物門（Arthropod）、甲殼綱（Crustacea）、十足目（Decapoda）、方蟹科（Grapsidae）,是我國重要的經(jīng)濟蟹類之一。雄性中華絨螯蟹精子核為非濃縮核,染色質(zhì)不同于一般動物精子核的致密結(jié)構(gòu),且形成機制未知。組蛋白作為核小體的重要組成部分,其翻譯后修飾產(chǎn)物、組蛋白變體對蛋白質(zhì)和DNA結(jié)合程度、DNA轉(zhuǎn)錄水平產(chǎn)生影響,進而調(diào)控染色質(zhì)或染色體的結(jié)構(gòu),發(fā)揮所需生物學功能。同時在體內(nèi),分子伴侶對組蛋白與DNA形成正確構(gòu)象的核小體具有輔助作用。為探究中華絨螯蟹精子發(fā)生過程中非濃縮核形成的原因,本文以保守性低的組蛋白H1為切入點,研究其變體組蛋白H1.1等、分子伴侶核質(zhì)蛋白1-假基因9（Nucleophosmin1 pseudogene9,NPM1P9）、核小體組裝蛋白1樣1（Nucleosome assembly protein 1 like 1,NAP1L1）在精子發(fā)生過程的表達和動態(tài)分布特征。同時,研究組蛋白H1與分子伴侶NPM1P9間的相互作用,旨在從分子和細胞水平進行全面探究。本研究利用分子克隆技術(shù),構(gòu)建H1... 

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 精子發(fā)生與精子核
        1.1.1 精子發(fā)生
        1.1.2 精子形態(tài)與精子核
    1.2 精子核堿性蛋白與核小體
        1.2.1 精子核堿性蛋白
        1.2.2 核小體結(jié)構(gòu)
        1.2.3 連接組蛋白H1
    1.3 表觀遺傳相關內(nèi)容
        1.3.1 表觀遺傳
        1.3.2 組蛋白變體
        1.3.3 組蛋白修飾
    1.4 分子伴侶
        1.4.1 組蛋白分子伴侶
        1.4.2 組蛋白H1與其分子伴侶
    1.5 單克隆抗體技術(shù)
        1.5.1 研究背景
        1.5.2 McAb的應用
    1.6 研究目的與意義
第二章 中華絨螯蟹組蛋白H1和H1.1的表達與單克隆抗體的制備
    2.1 實驗材料、試劑與儀器
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗試劑與配方
        2.1.3 主要實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 構(gòu)建中華絨螯蟹H1和H1.1基因的表達載體
        2.2.2 原核表達中華絨螯蟹組蛋白H1和H1.1
        2.2.3 制備McAb-H1和McAb-H1.1
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 中華絨螯蟹H1和H1.1基因的表達
        2.3.2 中華絨螯蟹組蛋白H1和H1.1的表達與純化
        2.3.3 ELISA優(yōu)化與McAb-H1和McAb-H1.1的特性
    2.4 討論
第三章 中華絨螯蟹組蛋白H1和H1.1的表達特征
    3.1 實驗材料、試劑與儀器
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗試劑與配方
        3.1.3 主要實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 Western blot探究組蛋白H1和H1.1在中華絨螯蟹精巢、精子中的表達
        3.2.2 免疫熒光探究中華絨螯蟹組蛋白H1和H1.1在精子發(fā)生過程中的定位
        3.2.3 實時熒光定量PCR探究中華絨螯蟹H1和H1.1基因的相對表達
        3.2.4 利用生物信息學分析中華絨螯蟹組蛋白H1和H1.1
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 中華絨螯蟹組蛋白H1和H1.1在精巢、精子中的表達
        3.3.2 中華絨螯蟹組蛋白H1和H1.1在精子發(fā)生過程中的定位
        3.3.3 中華絨螯蟹H1和H1.1基因的相對表達
        3.3.4 中華絨螯蟹組蛋白H1和H1.1的生物信息學分析結(jié)果
    3.4 討論
第四章 中華絨螯蟹組蛋白H1的分子伴侶
    4.1 實驗材料、試劑與儀器
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗試劑與配方
        4.1.3 主要實驗儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 構(gòu)建中華絨螯蟹NPM1P9基因的表達載體
        4.2.2 Western blot探究中華絨螯蟹NPM1P9在精巢、精子中的表達
        4.2.3 免疫熒光探究中華絨螯蟹NPM1P9、NAP1L1在精子發(fā)生過程中的定位
        4.2.4 免疫共沉淀探究中華絨螯蟹組蛋白H1與NPM1P9 間的相互作用
        4.2.5 原核表達中華絨螯蟹NPM1P9蛋白
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 中華絨螯蟹NPM1P9基因的克隆
        4.3.2 中華絨螯蟹NPM1P9在精巢、精子中的表達
        4.3.3 中華絨螯蟹NPM1P9、NAP1L1在精子發(fā)生過程中的定位
        4.3.4 中華絨螯蟹組蛋白H1與NPM1P9間的體內(nèi)相互作用
        4.3.5 中華絨螯蟹NPM1P9蛋白的表達
    4.4 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻
致謝
攻讀學位期間取得的科研成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]精子形成中的表觀遺傳調(diào)控[J]. 康俊炎,茍?zhí)m濤,劉默芳.  生命科學. 2017(10)
[2]鋸緣青蟹精子堿性蛋白分布與受精[J]. 康現(xiàn)江,李少菁,王桂忠,項有茂.  動物學報. 2001(S1)
[3]真蝦部動物精子結(jié)構(gòu)研究進展[J]. 姜葉琴,韓志萍.  湖州師范學院學報. 2001(03)
[4]十足目甲殼動物精子發(fā)生過程頂體形成和細胞核變化[J]. 康現(xiàn)江,王所安.  動物學雜志. 2000(04)
[5]蟹類精子超微結(jié)構(gòu)的比較研究[J]. 堵南山,賴偉,陳立僑,薛魯征,李太武,王蘭.  動物學研究. 1999(05)
[6]甲殼動物精子學研究概況Ⅱ.精子發(fā)生與精子的生化組成[J]. 王藝磊,張子平,李少菁.  動物學雜志. 1998(04)
[7]長江華溪蟹精子超微結(jié)構(gòu)的研究[J]. 劉芳,談奇坤.  動物學雜志. 1997(01)
[8]三種對蝦雄性生殖系統(tǒng)解剖學、組織學與組織化學的研究[J]. 張子平，王藝磊.  廈門水產(chǎn)學院學報. 1996(02)
[9]鋸緣青蟹精子超微結(jié)構(gòu)的研究[J]. 上官步敏,李少菁.  動物學報. 1994(01)
[10]中華絨螯蟹精子的研究——Ⅰ.精子的形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)[J]. 堵南山,賴偉,薛魯征.  海洋與湖沼. 1987(02)

博士論文
[1]中華絨螯蟹精子核非濃縮的表觀遺傳機制[D]. 李根亮.河北大學 2011

碩士論文
[1]組蛋白變體macroH2A分子伴侶的篩選[D]. 林娜.北京協(xié)和醫(yī)學院 2016
[2]組蛋白變體對河蟹精子非濃縮核的影響[D]. 張才達.河北大學 2016
[3]中華絨螯蟹組蛋白H1基因的克隆及其在精巢發(fā)育中的表達特征[D]. 錢陪陪.河北大學 2015
[4]中華絨螯蟹（Eriochier sinensis）血細胞組成、功能及體外培養(yǎng)的研究[D]. 洪宇航.上海海洋大學 2013



本文編號：3727897