“腐皮綜合征”因其高感染率和高死亡率,被認(rèn)為是危害仿刺參養(yǎng)殖的最嚴(yán)重疾病之一。燦爛弧菌（Vibrio splendidus）是引起“腐皮綜合征”的主要致病菌之一,且感染范圍廣,致病性強(qiáng)。目前,對(duì)該病的防治主要依靠抗生素和化學(xué)藥物,但藥物的長期大量使用甚至濫用,不僅導(dǎo)致耐藥性菌株的出現(xiàn),而且還會(huì)影響食品安全和生態(tài)平衡,間接嚴(yán)重危害人類健康。本研究以滅活燦爛弧菌為抗原,免疫蛋雞制備特異性卵黃抗體（IgY）。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)測(cè)定特異性IgY最高效價(jià)達(dá)1：320000。經(jīng)水稀釋-凍融-兩步鹽析-超濾分離純化IgY,最終獲得抗體純度達(dá)83%。液體和固體兩種培養(yǎng)條件下,特異性IgY能顯著抑制燦爛弧菌的生長（P＜0.05）并有效防止該菌在培養(yǎng)基上的黏附,表明IgY具有黏附阻滯作用。結(jié)晶紫染色法和微生物碳?xì)湮侥芰?shí)驗(yàn)表明,特異性IgY能顯著降低燦爛弧菌的被膜形成能力和表面疏水性（P＜0.05）,進(jìn)而減弱其黏附力,降低其致病性。免疫熒光電鏡、掃描電鏡和透射電鏡觀察顯示,特異性IgY與抗原菌親和力強(qiáng),且能凝集抗原菌,并使菌體表面結(jié)構(gòu)變得粗糙,改變其細(xì)胞表面結(jié)構(gòu),甚至影響菌體細(xì)胞壁完整性。特異性IgY與燦... 

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 IgY的特性及作用機(jī)制
        1.1.1 IgY的結(jié)構(gòu)和功能
        1.1.2 IgY的理化性質(zhì)及優(yōu)勢(shì)分析
        1.1.3 IgY的作用機(jī)制
    1.2 IgY在水產(chǎn)領(lǐng)域的應(yīng)用
        1.2.1 IgY在細(xì)菌性水產(chǎn)疾病中的應(yīng)用
        1.2.2 IgY在病毒性水產(chǎn)疾病中的應(yīng)用
        1.2.3 IgY在水產(chǎn)品保鮮中的應(yīng)用
        1.2.4 IgY在水產(chǎn)毒素及寄生蟲診斷中的應(yīng)用
    1.3 仿刺參“腐皮綜合征”的研究進(jìn)展
        1.3.1 發(fā)病癥狀和流行情況
        1.3.2 “腐皮綜合征”病因分析
        1.3.3 “腐皮綜合征”的防治
    1.4 本論文的研究意義
2 抗?fàn)N爛弧菌特異性IgY的制備
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.5 實(shí)驗(yàn)溶液配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 抗原的制備
        2.3.2 蛋雞的免疫
        2.3.3 IgY水溶性組分的提取
        2.3.4 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)特異性IgY效價(jià)
        2.3.5 IgY的提純
        2.3.6 IgY的蛋白質(zhì)含量測(cè)定
        2.3.7 SDS-PAGE檢測(cè)IgY的純度
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 抗原最佳包被濃度的確定
        2.4.2 ELISA檢測(cè)抗?fàn)N爛弧菌特異性IgY效價(jià)檢測(cè)結(jié)果
        2.4.3 BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)含量
        2.4.4 SDS-PAGE檢測(cè)特異性IgY的純度
    2.5 分析和討論
    2.6 小結(jié)
3 特異性IgY與燦爛弧菌的體外作用研究
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)菌種
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 液體培養(yǎng)條件下IgY對(duì)燦爛弧菌的體外生長抑制實(shí)驗(yàn)
        3.3.2 固體培養(yǎng)條件下IgY對(duì)燦爛弧菌的體外生長抑制實(shí)驗(yàn)
        3.3.3 IgY對(duì)燦爛弧菌生物被膜形成的影響
        3.3.4 IgY對(duì)燦爛弧菌疏水性的影響
        3.3.5 透射電鏡、掃描電鏡和免疫熒光電鏡
        3.3.6 IgY對(duì)燦爛弧菌細(xì)胞壁完整性的影響
        3.3.7 統(tǒng)計(jì)分析
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 液體培養(yǎng)條件下IgY的體外抑菌效果
        3.4.2 固體培養(yǎng)條件下IgY的體外抑菌效果
        3.4.3 IgY對(duì)燦爛弧菌生物被膜形成能力的影響
        3.4.4 IgY對(duì)燦爛弧菌表面疏水性的影響
        3.4.5 透射電鏡觀察
        3.4.6 免疫熒光電鏡觀察
        3.4.7 掃描電鏡觀察
        3.4.8 IgY對(duì)燦爛弧菌細(xì)胞壁完整性的影響
    3.5 分析與討論
    3.6 小結(jié)
4 特異性IgY對(duì)燦爛弧菌感染仿刺參的保護(hù)效果研究
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)菌種
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.4 溶液配制
        4.2.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 IgY注射治療對(duì)仿刺參存活率的影響
        4.3.2 IgY浸浴治療對(duì)仿刺參存活率的影響
        4.3.3 IgY浸浴預(yù)防對(duì)仿刺參存活率的影響
        4.3.4 IgY對(duì)仿刺參組織中載菌量的影響
        4.3.5 IgY對(duì)仿刺參吞噬細(xì)胞活性的影響
        4.3.6 IgY對(duì)仿刺參吞噬細(xì)胞活性的影響
        4.3.7 IgY對(duì)仿刺參免疫相關(guān)酶及因子的活性檢測(cè)
        4.3.8 統(tǒng)計(jì)分析
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 IgY注射治療對(duì)仿刺參存活率的影響
        4.4.2 IgY浸浴治療對(duì)仿刺參存活率的影響
        4.4.3 IgY浸浴預(yù)防對(duì)仿刺參存活率的影響
        4.4.4 IgY對(duì)仿刺參組織中載菌量的影響
        4.4.5 IgY對(duì)仿刺參吞噬細(xì)胞活性的影響
        4.4.6 IgY對(duì)仿刺參免疫相關(guān)酶及因子的活性影響
    4.5 分析與討論
    4.6 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[6]致魚細(xì)菌性敗血癥嗜水氣單胞菌特異性卵黃抗體的制備及性能研究[D]. 鄒棟良.大連理工大學(xué) 2010
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[8]免疫增強(qiáng)劑及疫苗對(duì)刺參（Apostichopus japonicus）免疫酶活性及抗病力影響的初步研究[D]. 孔偉麗.中國海洋大學(xué) 2008
[9]養(yǎng)殖刺參“腐皮綜合征”致病菌的鑒定及其滅活菌苗對(duì)刺參免疫作用的研究[D]. 周曉蘇.中國海洋大學(xué) 2008
[10]養(yǎng)殖刺參（Apostichopus japonicus）腐皮綜合癥的發(fā)生與異養(yǎng)菌區(qū)系間的關(guān)系[D]. 黃華偉.中國海洋大學(xué) 2007



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