本研究以歐亞養(yǎng)殖良種大菱鲆（Scophthalmus maximus）為實驗材料,運用組織切片、原位雜交、cDNA末端快速擴增（RACE）、實時熒光定量PCR和原核表達等技術手段,比較了雌性大菱鲆和小鼠垂體組織形態(tài)結構、細胞類型和促性腺激素（FSHβ和LHβ）在垂體中分布;篩選出在大菱鲆卵巢發(fā)育過程中下丘腦、垂體、卵巢和肝臟中的最佳內參基因;獲取了大菱鲆促性腺激素共同糖蛋白α亞基（CGα）和LHβ的全長cDNA序列,分析其生物信息學特性,查明了其組織表達和下丘腦-垂體-性腺（HPG）軸關鍵基因（fshβ、lshβ、cgα、Gn RH、kiss及kissr）在仔魚早期發(fā)育過程中表達規(guī)律;通過大腸桿菌原核表達成功制備了大菱鲆FSHβ和LHβ重組蛋白。本研究結果豐富了大菱鲆生殖內分泌調控機制研究內容,同時為大菱鲆苗種標準化生產提供了有效技術支撐。相關結果如下:1.大菱鲆和小鼠垂體結構及激素分泌細胞解剖學比較對性成熟雌性大菱鲆和小鼠垂體進行組織學和組織化學分析,結果表明:大菱鲆垂體呈典型的雞心形,背腦室,位于間腦腹側表面,通過垂體柄與下丘腦緊密相連。相比之下,小鼠垂體呈橢圓形,中心為灰白色,兩... 

【文章頁數】：83 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第一章 文獻綜述
    1.1 硬骨魚類下丘腦-垂體-性腺(HPG)軸調控機制
    1.2 魚類腦垂體結構研究進展
        1.2.1 魚類腦垂體的形態(tài)結構
        1.2.2 魚類腦垂體研究進展
    1.3 促性腺激素釋放激素及kisspeptin對魚類的生殖調控
    1.4 魚類促性腺激素研究進展
        1.4.1 魚類促性腺激素的類型和結構特征
        1.4.2 硬骨魚類促性腺激素的生理功能及分泌調控
        1.4.3 魚類促性腺激素的體外重組表達及其生產中的應用
    1.5 本研究的主要內容及研究意義
第二章 大菱鲆和小鼠垂體結構及激素分泌細胞解剖學比較
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 大菱鲆和小鼠垂體H.E.染色
        2.1.3 大菱鲆和小鼠垂體改良Mallory三色染色
    2.2 統(tǒng)計分析
        2.2.1 大菱鲆和小鼠垂體各分區(qū)面積百分比
        2.2.2 大菱鲆和小鼠垂體內分泌細胞的百分數和細胞直徑
    2.3 實驗結果
        2.3.1 大菱鲆和小鼠垂體結構特征及細胞類型
        2.3.2 大菱鲆和小鼠垂體細胞類型面積比和細胞直徑的比較
    2.4 討論
第三章 大菱鲆卵巢發(fā)育過程中內參基因的篩選
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗用魚
        3.1.2 大菱鲆不同發(fā)育時期卵巢H.E染色
        3.1.3 RNA的提取與cDNA的合成
        3.1.4 引物設計與PCR擴增效率
        3.1.5 實時定量RT-PCR
        3.1.6 統(tǒng)計分析
    3.2 實驗結果
        3.2.1 大菱鲆不同發(fā)育時期卵巢結構
        3.2.2 內參基因qRT-PCR的擴增
        3.2.3 大菱鲆卵巢發(fā)育過程中下丘腦、垂體、卵巢及肝臟組織內參基因的Ct值
        3.2.4 geNorm軟件分析內參基因的表達穩(wěn)定性
        3.2.5 NormFinder軟件分析內參基因的表達穩(wěn)定性
        3.2.6 BesKeeper軟件分析內參基因的表達穩(wěn)定性
        3.2.7 大菱鲆卵巢發(fā)育過程中不同內參基因對ERα基因表達的影響
    3.3 討論
第四章 大菱鲆促性腺激素亞基CGα和LHβ的cDNA克隆及HPG軸關鍵基因在早期發(fā)育過程中的表達分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實驗用魚
        4.1.2 大菱鲆CGα和LHβ的cDNA序列克隆
        4.1.3 CGα和LHβ序列分析
        4.1.4 大菱鲆CGα、FSHβ和LHβ基因的組織表達及相關調控基因在早期發(fā)育過程中的表達
        4.1.5 大菱鲆和小鼠促性腺激素的原位雜交(ISH)和免疫組織化學
    4.2 實驗結果
        4.2.1 大菱鲆CGα和LHβ的序列特征分析
        4.2.2 大菱鲆CGα和LHβ氨基酸的同源性比較及GTH系統(tǒng)進化分析
        4.2.3 大菱鲆CGα、FSHβ和LHβ的組織表達分析
        4.2.4 FSHβ和LHβ在大菱鲆和小鼠垂體中的定位
        4.2.5 大菱鲆GTHs、GnRH、kiss及 kissr基因在早期發(fā)育過程中的表達分析
    4.3 討論
第五章 大菱鲆促性腺激素FSHβ和LHβ基因原核表達
    5.1 材料與方法
        5.1.1 樣品采集
        5.1.2 cDNA第一鏈的合成和原核表達質粒的構建
        5.1.3 FSHβ和LHβ原核表達和Western-blot驗證
    5.2 實驗結果
    5.3 討論
結論和創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]魚類促性腺激素基因研究進展[J]. 呂紹巾,張?zhí)烀?趙文.  生物學雜志. 2017(03)
[2]Evaluation of reference genes for quantitative real-time PCR analysis of gene expression during early development processes of the tongue sole（Cynoglossus semilaevis）[J]. MA Qian,ZHUANG Zhimeng,FENG Wenrong,LIU Shufang,TANG Qisheng.  Acta Oceanologica Sinica. 2015(10)
[3]Kisspeptin調控魚類生殖內分泌的研究進展[J]. 卓琦.  動物學研究. 2013(05)
[4]脂聯(lián)素受體（AdpR1和AdpR2）和促性腺激素釋放激素受體（GnRHR）及卵泡刺激素（FSH-β）和黃體生成素（LH-β）基因在皖南花豬垂體組織中的表達[J]. 張凌齊,李云,周杰,田磊磊,李維新,劉力源,張淑靜.  農業(yè)生物技術學報. 2013(05)
[5]鲆鰈魚類飼料產業(yè)現(xiàn)狀與發(fā)展對策[J]. 高健,廖紅梅.  中國水產. 2010(03)
[6]大菱鲆脾臟cDNA文庫構建、EST序列分析與免疫抗病相關基因的篩選[J]. 孟亮,陳松林,劉洋.  水產學報. 2009(05)
[7]哺乳動物下丘腦-垂體-卵巢軸的研究進展[J]. 王凌燕,王樹迎,侯衍猛,譚雷濤.  動物醫(yī)學進展. 2005(07)
[8]促性腺激素釋放激素（GnRH）結構與功能及其受體的進化發(fā)展[J]. 林浩然.  中山大學學報(自然科學版). 2004(06)
[9]大黃魚腦垂體組織學與免疫組織化學[J]. 翁幼竹,方永強,周晶,謝芳靖,劉家富.  中國水產科學. 2003(01)
[10]海水養(yǎng)殖新品種介紹─—大菱鲆[J]. 雷霽霖.  中國水產. 2000(04)

博士論文
[1]大菱鲆性腺分化以及Mtnrs,kiss/kissr和GnRH在性腺成熟過程中的表達特征[D]. 趙春彥.中國科學院大學(中國科學院海洋研究所) 2017
[2]不同倍性鯽鯉腦垂體細胞結構和HPG軸相關基因的表達及育性研究[D]. 龍昱.湖南師范大學 2009
[3]中肋骨條藻增殖細胞核抗原基因表達量與生長關系的研究[D]. 何閃英.中國海洋大學 2007

碩士論文
[1]條石鯛促性腺激素基因的克隆、表達和性類固醇激素分析[D]. 陳圣毅.上海海洋大學 2014
[2]哈維氏弧菌超氧化物歧化酶的原核表達及免疫原性的研究[D]. 辛瑞曉.中國海洋大學 2011
[3]草魚促性腺激素基因原核表達及多克隆抗體的制備[D]. 劉瓊.湖南師范大學 2011
[4]大菱鲆不同發(fā)育階段消化生理的研究[D]. 陳慕雁.中國海洋大學 2004



本文編號：3710857