桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)作為一個功能強(qiáng)大的表達(dá)載體已被廣泛地應(yīng)用于昆蟲細(xì)胞中重組蛋白的表達(dá)及亞單位疫苗的開發(fā)，在哺乳動物細(xì)胞中，桿狀病毒不能進(jìn)行復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，具較強(qiáng)安全性。含有非昆蟲細(xì)胞的啟動子（如CMV的啟動子）的重組桿狀病毒，可以有效地傳遞外源基因?qū)敕抢ハx細(xì)胞并實現(xiàn)外源基因高效表達(dá)。 1．草魚出血病病毒GCRV VP7蛋白亞單位/VP6DNA聯(lián)合口服疫苗的制備及免疫效果評價 將團(tuán)頭魴（Megalobrama amblycephala）的β-肌動蛋白啟動子控制的VP6蛋白基因克隆進(jìn)桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pFastBacTMDual中，同時將GCRV的另一結(jié)構(gòu)蛋白VP7基因置于桿狀病毒多角體蛋白（polh）基因啟動子控制之下，構(gòu)建雙啟動子控制雙結(jié)構(gòu)基因的蛋白—核酸疫苗表達(dá)載體pFastTMDual-VP7-VP6-β-actin，并獲得重組桿狀病毒Bacmid-VP7-VP6-β-actin，與劉林基于vp6單基因、徐詩英基于vp7單基因的蛋白/核酸聯(lián)合口服疫苗不同，期望研制出能夠高效對抗GCRV的草魚疫苗。 本研究利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在家蠶卵巢細(xì)胞及蠶蛹中進(jìn)行GCRV結(jié)構(gòu)蛋白VP... 

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 草魚呼腸孤病毒相關(guān)研究
        1.1 草魚出血病病毒的基因結(jié)構(gòu)
        1.2 GCRV 編碼的蛋白及功能
            1.2.1 抗原性
            1.2.2 病毒感染特性
        1.3 呼腸孤病毒的細(xì)胞毒性
        1.4 草魚出血病的檢測
        1.5 草魚出血病的防治
        參考文獻(xiàn)
    第二章 禽流感相關(guān)研究
        2.1 禽流感病毒基因組
        2.2 AIV 基因組編碼的蛋白與功能
        2.3 流感病毒的遺傳變異
        2.4 禽流感疫苗的研究進(jìn)展
            2.4.1 全病毒滅活疫苗
            2.4.2 亞單位疫苗
            2.4.3 重組活載體疫苗
            2.4.4 核酸疫苗
            2.4.5 抗原表位疫苗
        參考文獻(xiàn)
第二部分 研究報告
    第三章 研究目的和研究內(nèi)容
        3.1 研究目的和意義
        3.2 研究內(nèi)容
            3.2.1 草魚出血病主要研究內(nèi)容
            3.2.2 禽流感多表位疫苗研究內(nèi)容
            3.2.3 草魚出血病疫苗研制的主要研究技術(shù)路線
            3.2.4 禽流感多表位疫苗的主要研究技術(shù)路線
        參考文獻(xiàn)
    第四章 vp7、vp6 原核表達(dá)及多克隆抗體的制備
        摘要
        1 實驗材料
            1.1 生物材料
            1.2 實驗試劑
            1.3 實驗儀器
        2 實驗方法
            2.1 vp7 基因、vp6 基因、β-actin 啟動子的克隆
            2.2 vp7、vp6、基因及β-actin 啟動子的 T 載體克隆與鑒定
            2.3 pET28a(+)-VP7、pET28a(+)-VP6 表達(dá)載體的構(gòu)建
            2.4 重組載體 pET28a(+)-VP7 及 pET28a(+)-VP6 的誘導(dǎo)表達(dá)
            2.5 VP7、VP6 蛋白的 SDS-PAGE 分析
            2.6 VP7、VP6 蛋白的 Western blotting 分析
            2.7 VP7、VP6 多克隆抗體的制備
        3 實驗結(jié)果
            3.1 vp7、vp6 基因及β-actin 基因啟動子擴(kuò)增的結(jié)果
            3.2 vp7、vp6 基因及β-actin 的 T 載體克隆結(jié)果
            3.3 表達(dá)載體 pET28a(+)-VP7 的鑒定
            3.4 重組 VP7、VP6 蛋白的鑒定
            3.5 多克隆抗體的檢測
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
    第五章 GCRV VP7 蛋白亞單位/vp6 DNA 聯(lián)合口服疫苗的制備及免疫效果評價
        摘要
        1 實驗材料
            1.1 生物材料
            1.2 實驗試劑
            1.3 實驗儀器
        2 實驗方法
            2.1 重組供體質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.2 重組 Bacmid 的獲得
            2.3 重組病毒的獲得
            2.4 重組蛋白的表達(dá)檢測
            2.5 CIK 細(xì)胞的培養(yǎng)
            2.6 重組病毒接種 CIK 細(xì)胞及 VP6 抗原表達(dá)的檢測
            2.7 疫苗的制備
            2.8 疫苗口服免疫魚體
            2.10 RT-PCR 檢測免疫魚體中 vp6 基因的表達(dá)
            2.11 組織免疫熒光
        3 結(jié)果與分析
            3.1 重組轉(zhuǎn)移載體 pFastTM-Dual-VP7-VP6-β-actin 的鑒定
            3.2 重組病毒 Bacmid-VP7-VP6-β-actin 的產(chǎn)生及鑒定
            3.3 重組病毒的獲得及鑒定
            3.4 重組蛋白的表達(dá)檢測
            3.5 轉(zhuǎn)染重組病毒的 CIK 細(xì)胞中表達(dá) VP6 抗原的檢測
            3.6 口服免疫后魚血中 vp6 mRNA 的檢測
            3.7 免疫熒光檢測免疫草魚組織中 VP6 蛋白
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
    第六章 禽流感多抗原表位在家蠶中的表達(dá)
        摘要
        1 實驗材料
            1.1 生物材料
            1.2 實驗試劑
        2 實驗方法
            2.1 CTL T 細(xì)胞表位盒核苷酸序列
            2.2 Th 及 B 細(xì)胞表位盒核苷酸序列
            2.3 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.4 重組 Bacmid 的獲得
            2.5 重組桿狀病毒的獲得
            2.6 CTLT 抗原表位及 THB 抗原表位表達(dá)與鑒定
        3 結(jié)果與分析
            3.1 供體質(zhì)粒的鑒定
            3.2 重組 Bacmid 的獲得
            3.3 重組桿狀病毒的獲得
            3.4 表位抗原表達(dá)檢測
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
結(jié)論
    1 已取得的成果
    2 有待進(jìn)行的研究
公開發(fā)表學(xué)術(shù)論文
附錄一：縮略詞表
    1.常規(guī)縮略詞表
    2.專業(yè)詞匯縮略詞表
附錄二：部分質(zhì)粒圖譜
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[9]H5N1亞型禽流感病毒HA基因重組新城疫病毒活載體疫苗株組織嗜性的研究[J]. 董俊斌,步志高.  江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2010(04)
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本文編號：3710349