鰻弧菌和殺鮭氣單胞菌是水產(chǎn)養(yǎng)殖中兩種常見的病原菌,導(dǎo)致世界各地的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)蒙受巨大損失。疫苗接種是預(yù)防各類養(yǎng)殖病害最為有效的措施之一�？紤]到安全性、功效和成本等因素,魚用疫苗目前仍以滅活疫苗為主。然而,滅活疫苗免疫保護效果常不盡人意,需通過添加佐劑來增強疫苗效果。盡管常規(guī)商業(yè)化魚用佐劑仍以油佐劑為主,但油佐劑會引起內(nèi)臟黏連、佐劑殘留和生長抑制等副作用。因此,對于魚用疫苗的研制,開發(fā)副作用更為溫和的非油佐劑是十分必要的。本論文首先基于三種CpG ODNs構(gòu)建了 pCpG佐劑,以大菱鲆為實驗動物,考察了該pCpG佐劑配合鰻弧菌滅活疫苗的免疫保護效果。結(jié)果表明,pCpG佐劑可提高鰻弧菌滅活疫苗免疫保護效果,且佐劑劑量與疫苗免疫效應(yīng)非正相關(guān)。同時,pCpG佐劑可有效降低鰻弧菌滅活疫苗抗原含量,在低劑量抗原免疫下為大菱鲆提供了高達84%的RPS,較無佐劑疫苗組增加43%。對體內(nèi)免疫應(yīng)答的檢測結(jié)果表明pCpG佐劑可以有效提高大菱鲆體內(nèi)抗體水平并激活固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答。由此可見,pCpG佐劑可作為后續(xù)魚用疫苗開發(fā)的候選佐劑種類。另外,本論文還基于鋁佐劑制備了殺鮭氣單胞菌滅活疫苗,并以大菱鲆為實... 

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻綜述
    1.1 水產(chǎn)養(yǎng)殖及其病害
        1.1.1 鰻弧菌
        1.1.2 殺鮭氣單胞菌
        1.1.3 水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防治
    1.2 魚用疫苗
        1.2.1 滅活疫苗
        1.2.2 減毒活疫苗
        1.2.3 亞單位疫苗
        1.2.4 DNA疫苗
    1.3 免疫方式
        1.3.1 注射免疫
        1.3.2 浸泡免疫
        1.3.3 口服免疫
    1.4 魚用疫苗佐劑
        1.4.1 油佐劑
        1.4.2 鋁佐劑
        1.4.3 CpG佐劑
        1.4.4 其他佐劑
    1.5 本課題研究內(nèi)容及意義
第2章 pCpG佐劑鰻弧菌滅活疫苗的免疫活性
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗動物及菌株
        2.2.2 CpG序列及載體質(zhì)粒
        2.2.3 實驗所用試劑
        2.2.4 培養(yǎng)基及實驗試劑
    2.3 實驗方法
        2.3.1 大菱鲆的馴養(yǎng)及日常檢查
        2.3.2 鰻弧菌對大菱鲆的攻毒實驗
        2.3.3 pCpG菌株的構(gòu)建
        2.3.4 pCpG佐劑的提取
        2.3.5 含pCpG佐劑疫苗的制備
        2.3.6 不同劑量pCpG佐劑疫苗的免疫實驗
    2.4 結(jié)果分析
        2.4.1 鰻弧菌在大菱鲆上的攻毒劑量確定
        2.4.2 pCpG佐劑的構(gòu)建
        2.4.3 不同劑量pCpG佐劑疫苗的免疫效果
    2.5 實驗討論
    2.6 本章小結(jié)
第3章 pCpG佐劑的低劑量抗原疫苗的免疫效果
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗動物和實驗菌株
        3.2.2 實驗相關(guān)試劑和引物
    3.3 實驗方法
        3.3.1 pCpG佐劑搭配低劑量疫苗的免疫實驗
        3.3.2 大菱鲆免疫后血清各參數(shù)的檢測
        3.3.3 大菱鲆免疫后脾臟內(nèi)基因的表達
        3.3.4 副作用及體內(nèi)表達情況的檢測
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 pCpG佐劑搭配低劑量疫苗的相對免疫保護率
        3.4.2 免疫后血清抗體,SOD和總蛋白的含量變化
        3.4.3 脾臟相關(guān)基因的表達水平
        3.4.4 pCpG佐劑的副作用及體內(nèi)表達情況
    3.5 實驗討論
    3.6 本章小結(jié)
第4章 基于鋁膠佐劑的殺鮭氣單胞菌滅活疫苗
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
    4.3 實驗方法
        4.3.1 菌株的分離鑒定及保種
        4.3.2 殺鮭氣單胞菌對大菱鲆的攻毒實驗
        4.3.3 鋁膠佐劑的制備
        4.3.4 不同佐劑疫苗的免疫實驗
        4.3.5 免疫指標(biāo)的檢測
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 殺鮭氣單胞菌的鑒定
        4.4.2 殺鮭氣單胞菌在大菱鲆上的攻毒劑量確定
        4.4.3 殺鮭氣單胞菌疫苗的免疫保護力
        4.4.4 免疫后血清中抗體水平變化
        4.4.5 兩種佐劑的副作用
    4.5 實驗討論
    4.6 本章小結(jié)
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻
論文發(fā)表情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]首個草魚出血病活疫苗獲國家一類新獸藥證書[J].   農(nóng)民科技培訓(xùn). 2011(04)
[2]養(yǎng)殖大菱鲆病原菌——殺鮭氣單胞菌無色亞種的分離鑒定和組織病理學(xué)研究[J]. 呂俊超,張曉華,王燕,蘭建新,韓茵,劉云.  中國海洋大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2009(01)



本文編號：3697864