轉(zhuǎn)錄因子Sp1（Specificity protein1）可調(diào)控多種基因的激活，參與多數(shù)細(xì)胞的生長(zhǎng)分化和細(xì)胞周期代謝，與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。本研究利用T-A和RACE技術(shù)從草魚（Ctenopharyngodon idellus）腸道克隆出Sp1cDNA全序列，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)了草魚不同組織、不同發(fā)育時(shí)期Sp1基因的表達(dá)，并探討了在日糧中添加不同蛋白源、不同蛋白水平和谷氨酰胺二肽等營(yíng)養(yǎng)素對(duì)草魚Sp1基因表達(dá)的調(diào)控。 1、草魚Sp1cDNA克隆及生物信息學(xué)分析 草魚Sp1cDNA全長(zhǎng)為1914bp，包括1482bp的編碼區(qū)、5bp的5’UTR和426bp的3’UTR，共編碼493個(gè)氨基酸。等電點(diǎn)為8.27，主要的元素成分含量為C：2.23%，N：4.87%，H：2.43%，S：9.94%，T：11.16%。分子式為C2237H3600N662O738S20。氨基酸組成中，Thr（11.2%）和Gln（10.1%）含量相對(duì)較高。氨基酸序列的疏水性：MAX，2.93；MIN，-1.89。磷酸化位點(diǎn)：Ser21個(gè)，Thr7個(gè)，Tyr2個(gè)。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明Sp1在進(jìn)化上比... 

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語中英文對(duì)照
第一章 引言
    1.1 研究背景與意義
    1.2 SP 家族
        1.2.1 Sp 家族簡(jiǎn)介
        1.2.2 Sp 家族基本結(jié)構(gòu)和功能位點(diǎn)
    1.3 SP1 基因
        1.3.1 Sp1 的結(jié)構(gòu)與功能特征
        1.3.2 Sp1 表達(dá)及其功能的調(diào)控
        1.3.3 Sp1 轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)節(jié)
        1.3.4 Sp1 在腸道中的作用
    1.4 論文創(chuàng)新點(diǎn)
第二章 草魚 SP1 基因克隆及生物信息學(xué)分析
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 總 RNA 制備
        2.2.2 Sp1 cDNA 中間核心片段克隆
        2.2.3 Sp1 cDNA 3'端片段擴(kuò)增和克隆
        2.2.4 Sp1 cDNA 5'端片段擴(kuò)增和克隆
        2.2.5 Sp1 cDNA 全序列拼接
        2.2.6 草魚 Sp1 全長(zhǎng)氨基酸序列和蛋白結(jié)構(gòu)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 腸道總 RNA 提取
        2.3.2 Sp1 cDNA 克隆
        2.3.3 Sp1 生物信息學(xué)分析
    2.4 討論
第三章 草魚 SP1 的時(shí)空表達(dá)分析
    3.1 材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及取材
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 Sp1 基因表達(dá)量的檢測(cè)
        3.2.1 引物設(shè)計(jì)
        3.2.2 總 RNA 提取
        3.2.3 模板 cDNA 第一鏈合成
        3.2.4 Sp1 基因表達(dá)檢測(cè)
    3.3 數(shù)據(jù)處理
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 模板 cDNA 制備效果
        3.4.2 Sp1 mRNA 表達(dá)分析
    3.5 討論
第四章 外源蛋白對(duì)草魚腸道 SP1 基因表達(dá)的影響
    4.1 材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        4.2.2 引物設(shè)計(jì)
        4.2.3 總 RNA 提取
        4.2.4 cDNA 第一鏈合成
        4.2.5 Sp1 基因表達(dá)量檢測(cè)
    4.3 數(shù)據(jù)處理
    4.4 結(jié)果分析
        4.4.1 不同蛋白源對(duì)草魚腸道 Sp1 mRNA 表達(dá)的影響
        4.4.2 不同蛋白水平對(duì)草魚腸道 Sp1 mRNA 表達(dá)的影響
    4.5 討論
第五章 谷氨酰胺二肽對(duì)草魚腸道 SP1 基因表達(dá)的影響
    5.1 材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    5.2 方法
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        5.2.2 引物設(shè)計(jì)
        5.2.3 總 RNA 提取
        5.2.4 cDNA 第一鏈合成
        5.2.5 Sp1 基因表達(dá)檢測(cè)
    5.3 數(shù)據(jù)處理
    5.4 結(jié)果分析
        5.4.1 不同劑量谷氨酰胺二肽對(duì)草魚腸道 Sp1mRNA 表達(dá)的影響
    5.5 討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間學(xué)術(shù)業(yè)績(jī)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3681535