發(fā)布時(shí)間：2022-08-13 17:10

　　無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae）是唯一擁有B群特異性抗原的鏈球菌,也是一種人畜共患、傳染性極強(qiáng)的的病原菌。近年來,由無乳鏈球菌感染羅非魚引起的鏈球菌病,由于其發(fā)病快,死亡率高,且疾病一旦爆發(fā)很難控制,使其嚴(yán)重危害羅非魚養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展,并給全球羅非魚的養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。RovS轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子屬于Rgg家族,是無乳鏈球菌中一個(gè)重要的調(diào)節(jié)因子,能夠在轉(zhuǎn)錄上調(diào)控細(xì)菌基因組中多個(gè)基因的表達(dá),同時(shí)還能夠與細(xì)菌中其他調(diào)控系統(tǒng)協(xié)同作用,調(diào)控細(xì)菌的生長、繁殖及代謝等生命活動(dòng)。本研究以羅非魚源無乳鏈球菌ZQ0910 RovS轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子為研究對(duì)象,通過構(gòu)建rovS基因缺失突變株,比較野生株和突變株的生物學(xué)性狀,研究其致病力及相關(guān)毒力因子的表達(dá)情況,為進(jìn)一步探討羅非魚源無乳鏈球菌的分子致病機(jī)理奠定了理論基礎(chǔ)。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增rovS基因上下游同源片段rovS-F、rovS-R,以及紅霉素抗性基因Erm,然后利用溫度敏感型自殺載體pSET4s構(gòu)建重組質(zhì)粒pSET4s-rF-Erm-r R,通過電轉(zhuǎn)化的方法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入野生株S.agalactiae ZQ0910中,通... 

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 無乳鏈球菌的研究進(jìn)展
        1.1.1 無乳鏈球菌的概述
        1.1.2 無乳鏈球菌的流行性
        1.1.3 無乳鏈球菌的致病性
        1.1.4 無乳鏈球菌的感染癥狀
    1.2 無乳鏈球菌相關(guān)毒力因子
        1.2.1 莢膜多糖
        1.2.2 分選酶
        1.2.3 ScpB蛋白
        1.2.4 Sip蛋白
        1.2.5 FbsA蛋白
        1.2.6 SodA蛋白
    1.3 調(diào)節(jié)因子
        1.3.1 Rgg家族調(diào)節(jié)因子
        1.3.2 CodY全局轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子
        1.3.3 CcpA全局調(diào)節(jié)因子
        1.3.4 LuxS調(diào)節(jié)因子
    1.4 本研究的目的意義
2 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子RovS基因缺失株的構(gòu)建
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 質(zhì)粒
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 培養(yǎng)基和相關(guān)溶液的配制
        2.1.5 緩沖液的配制
        2.1.6 制備大腸桿菌感受態(tài)所用溶液的配置
        2.1.7 制備無乳鏈球菌感受態(tài)所用溶液的配置
        2.1.8 該實(shí)驗(yàn)所用引物
        2.1.9 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 rovS基因上、下游片段與Erm基因的擴(kuò)增
        2.2.2 rovS基因上、下游片段與Erm基因的融合
        2.2.3 重組質(zhì)粒pSET4s-rF-Erm-rR的構(gòu)建和鑒定
        2.2.4 rovS基因缺失株突變株的構(gòu)建
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 rovS基因上、下游片段的擴(kuò)增
        2.3.2 紅霉素抗性基因的擴(kuò)增
        2.3.3 rovS基因上、下游片段與Erm基因的融合
        2.3.4 重組質(zhì)粒pSET4s-rF-Erm-rR的鑒定
        2.3.5 無乳鏈球菌rovS基因缺失株的篩選
    2.4 討論
3 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子RovS的功能分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.5 革蘭氏染色液的配置
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 突變株的遺傳穩(wěn)定性分析
        3.2.2 生長曲線的繪制
        3.2.3 野生株S.agalactiae ZQ0910和突變株ΔrovS革蘭氏染色的比較
        3.2.4 血瓊脂平板上觀察細(xì)菌形態(tài)
        3.2.5 半數(shù)致死量（LD50）的測定
        3.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 突變株遺傳穩(wěn)定性分析
        3.3.2 生長曲線的比較
        3.3.3 革蘭氏染色的比較
        3.3.4 血瓊脂平板上生物學(xué)性狀的比較
        3.3.5 半數(shù)致死量（LD50）的測定
        3.3.6 mRNA的表達(dá)差異
    3.4 討論
4 結(jié)論
    4.1 羅非魚源無乳鏈球菌轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子RovS缺失株的構(gòu)建
    4.2 缺失突變株 ΔrovS功能分析
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：3677424