廣鹽性魚類滲透壓調(diào)節(jié)的分子機制是目前魚類生理學(xué)的研究熱點。花鰻鱺（Anguilla marmorata）是我國典型的降海洄游性魚類,花鰻鱺鰻苗須從海水遷移到淡水中生長發(fā)育,在環(huán)境鹽度變化的過程中,我們對花鰻鱺幼鰻適應(yīng)鹽度的機制還不清楚,而且這方面的基礎(chǔ)研究也相對滯后。本論文從基因克隆、mRNA表達(dá)、蛋白表達(dá)和酶活性四個方面入手,圍繞花鰻鱺幼鰻Vacuo lar-Type-H+-ATPase（VHA）、 Na+/K+-ATPase（NKA）和FXYD11適應(yīng)鹽度變化的調(diào)控機制進(jìn)行研究,并進(jìn)一步闡明調(diào)控基因在轉(zhuǎn)錄水平與蛋白質(zhì)表達(dá)水平上的差異及其在適應(yīng)鹽度變化過程中的作用,揭示花鰻鱺幼鰻?wèi)?yīng)對環(huán)境鹽度變化的適應(yīng)性調(diào)節(jié)機制。研究結(jié)果如下：（1）采用同源克隆和cDNA末端快速擴增（RACE）的方法分離克隆了花鰻鱺Vacuo lar-Type-H+-ATPase β1基因全長cDNA,長度1741bp,包括503個氨基酸的開放閱讀框（ORF）,83bp的5’末端非編碼區(qū)（UTR）以及146bp的3’末端非編碼區(qū)（UTR）。對推測的該基因氨基酸序列進(jìn)行同源性比對和系統(tǒng)分析顯示：花鰻鱺與其它魚類該基因的... 

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 花鰻鱺的研究進(jìn)展
        1.1.1 花鰻鱺的分類地位和資源現(xiàn)狀
        1.1.2 花鰻鱺的研究現(xiàn)狀
    1.2 廣鹽性魚類的滲透壓調(diào)節(jié)研究進(jìn)展
        1.2.1 氯細(xì)胞
        1.2.2 滲透壓調(diào)節(jié)的主要激素
        1.2.3 滲透壓調(diào)節(jié)重要的離子轉(zhuǎn)運體
    1.3 魚類3個滲透壓調(diào)節(jié)基因的研究進(jìn)展
        1.3.1 Vacuolar-Type-H~+-ATPase基因的研究
        1.3.2 Na~+-K~+-ATPase和FXYD基因的研究
    1.4 本課題研究的目的和意義
    1.5 研究內(nèi)容和技術(shù)路線
        1.5.1 研究內(nèi)容
        1.5.2 技術(shù)路線
第2章 花鰻鱺幼鰻Vacuolar-Type-H~+-ATPase亞基、Na~+-K~+-ATPase亞基及FXYD11基因的序列生物信息學(xué)分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗材料與設(shè)計
        2.1.2 VHAβ1、NKAα1以及FXYD11部分基因序列克隆
        2.1.3 cDNA末端快速擴增(RACE)技術(shù)獲得VHAβ1、NKAα1以及FXYD11基因全長
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 花鰻鱺滲透壓調(diào)節(jié)基因VHAβ1序列分析
        2.2.2 花鰻鱺滲透壓調(diào)節(jié)基因VHAβ1同源性分析及系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建
        2.2.3 花鰻鱺滲透壓調(diào)節(jié)基因NKAα1、FXYD11序列分析
    2.3 討論
    2.4 本章小結(jié)
第3章 花鰻鱺幼鰻Vacuolar-Type-H+~+-ATPaseβ1、Na~+-K~+-ATPaseα1以及FXYD11基因不同時空的差異表達(dá)
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗材料和設(shè)計
        3.1.2 總RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄
        3.1.3 熒光定量PCR檢測VHAβ1、NKAα1以及FXYD11mRNA的表達(dá)量
        3.1.4 數(shù)據(jù)處理與分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 花鰻鱺幼鰻進(jìn)入不同鹽度環(huán)境后在轉(zhuǎn)錄水平的VHAβ1基因mRNA的相對表達(dá)量
        3.2.2 花鰻鱺幼鰻進(jìn)入不同鹽度環(huán)境后在轉(zhuǎn)錄水平的NKAα1以及FXYD11基因mRNA的相對表達(dá)量
    3.3 討論
    3.4 本章小結(jié)
第4章 不同鹽度對花鰻鱺幼鰻Vacuolar-Type-H~+-ATPase、Na~+-K~+-ATPase活力和蛋白表達(dá)的影響
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實驗材料與設(shè)計
        4.1.2 不同鹽度下花鰻鱺幼鰻鰓和腎臟中Vacuolar-Type-H~+-ATPase、Na~+-K~+-ATPase酶活性的測定
        4.1.3 Western blotting技術(shù)檢測不同鹽度下花鰻鱺幼鰻鰓組織Vacuolar-Type-H~+-ATPase和Na~+K~+-ATPase的蛋白表達(dá)量
        4.1.4 數(shù)據(jù)處理與分析
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 不同鹽度對花鰻鱺幼鰻鰓和腎臟Vacuolar-Type-H~+-ATPase、Na~+-K~+-ATPase酶活力的影響
        4.2.2 不同鹽度對花鰻鱺幼鰻鰓組織Vacuolar-Type-H~+-ATPase、Na~+-K~+-ATPase蛋白表達(dá)的影響
    4.3 討論
    4.4 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的科研成果目錄
致謝



本文編號：3672996