發(fā)布時(shí)間：2022-08-02 19:00

　　嗜水氣單胞菌（Aeromonashydrophila）在水體環(huán)境中廣泛分布,常引致淡水魚類出血性敗血癥。而在同一生境中的四膜蟲（Tetrahymena）常以細(xì)菌為食。有研究提出,為了躲避原生動(dòng)物的捕食和消化壓力,細(xì)菌會(huì)發(fā)展出一系列適應(yīng)性改變,使其存活下來,而這些適應(yīng)性改變?nèi)缈雇淌�、抗消化的機(jī)制則可能演變?yōu)榧?xì)菌對(duì)其他生物的毒力因子。為了探究四膜蟲捕食壓力對(duì)嗜水氣單胞菌群體及基因轉(zhuǎn)錄水平的影響,本研究選取12株嗜水氣單胞菌不同毒力菌株與四膜蟲在貧瘡環(huán)境中共培養(yǎng),探討不同毒力菌株對(duì)四膜蟲捕食的抵抗作用以及在四膜蟲捕食壓力下細(xì)菌基因轉(zhuǎn)錄水平的變化,為進(jìn)一步探究四膜蟲在嗜水氣單胞菌毒力進(jìn)化方面的作用奠定基礎(chǔ)。1.嗜水氣單胞菌不同毒力菌株與四膜蟲共培養(yǎng)過程中的相互作用利用斑馬魚模型,測(cè)定12株嗜水氣單胞菌分離株毒力,在劃分毒力菌株與無毒株的基礎(chǔ)上,將不同毒力嗜水氣單胞菌與四膜蟲在貧瘡環(huán)境（PBSS緩沖液）中共培養(yǎng),分別檢測(cè)與四膜蟲共培養(yǎng)后細(xì)菌的相對(duì)存活率。結(jié)果發(fā)現(xiàn),四膜蟲能捕食不同毒力的菌株,對(duì)細(xì)菌群體的生長有不同程度影響,毒力較強(qiáng)菌株能抵抗四膜蟲的吞噬,甚至裂解四膜蟲,共培養(yǎng)12h后,細(xì)菌的相對(duì)... 

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 嗜水氣單胞菌毒力因子研究進(jìn)展
        1 病原學(xué)
        2 嗜水氣單胞菌的毒力因子
            2.1 黏附因子
            2.2 胞外產(chǎn)物
            2.3 分泌系統(tǒng)
            2.4 鐵離子獲取系統(tǒng)
            2.5 群體感應(yīng)系統(tǒng)
        3 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
    第二章 原生動(dòng)物與細(xì)菌的相互關(guān)系
        1 自由生活原生動(dòng)物
            1.1 自由生活原生動(dòng)物的定義及其形態(tài)學(xué)
            1.2 自由生活原生動(dòng)物在生態(tài)學(xué)中的重要性
            1.3 自由生活原生動(dòng)物在自然環(huán)境和人類生存環(huán)境中的分布
        2 常見的與細(xì)菌互作的原生動(dòng)物
            2.1 棘阿米巴
            2.2 四膜蟲
        3 細(xì)菌在原生動(dòng)物中的生活史
        4 環(huán)境和生物因素影響原生動(dòng)物內(nèi)細(xì)菌存活
        5 細(xì)菌與原生動(dòng)物之間的相互作用
            5.1 自由生活原生動(dòng)物成為細(xì)菌的環(huán)境“儲(chǔ)存器”
            5.2 環(huán)境中細(xì)菌通過自由生活原生動(dòng)物傳播
            5.3 自由生活原生動(dòng)物是細(xì)菌的傳播載體或“特洛伊木馬”
            5.4 細(xì)菌毒力增強(qiáng)
            5.5 原生動(dòng)物胞內(nèi)細(xì)菌受到保護(hù)
        參考文獻(xiàn)
第二篇 試驗(yàn)研究
    第三章 嗜水氣單胞菌不同毒力菌株與四膜蟲共培養(yǎng)過程中的相互作用
        1 材料與方法
            1.1 試驗(yàn)菌株、蟲株、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 培養(yǎng)基、試劑及儀器
            1.3 嗜水氣單胞菌對(duì)斑馬魚毒力測(cè)定
            1.4 蟲菌共培養(yǎng)對(duì)嗜水氣單胞菌群體生長的影響
            1.5 蟲菌共培養(yǎng)對(duì)四膜蟲群體生長的影響
            1.6 細(xì)菌上清對(duì)四膜蟲群體生長的影響
            1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        2 結(jié)果
            2.1 嗜水氣單胞菌LD_(50)測(cè)定
            2.2 蟲菌共培養(yǎng)對(duì)嗜水氣單胞菌群體生長的影響
            2.3 蟲菌共培養(yǎng)對(duì)四膜蟲群體生長的影響
            2.4 細(xì)菌上清對(duì)四膜蟲群體生長的影響
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第四章 四膜蟲捕食對(duì)嗜水氣單胞菌不同毒力菌株蟲體內(nèi)存活的影響
        1 材料與方法
            1.1 試驗(yàn)菌株、蟲株及其來源
            1.2 培養(yǎng)基、試劑及儀器
            1.3 綠色熒光蛋白標(biāo)記嗜水氣單胞菌
            1.4 四膜蟲與Ah~(GFP)共培養(yǎng)
            1.5 四膜蟲中細(xì)菌細(xì)胞活性檢測(cè)
            1.6 透射電鏡觀察
        2 結(jié)果
            2.1 綠色熒光蛋白標(biāo)記嗜水氣單胞菌
            2.2 四膜蟲捕食嗜水氣單胞菌
            2.3 細(xì)菌在四膜蟲中的命運(yùn)
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第五章 SCOTS篩選嗜水氣單胞菌暴露在四膜蟲環(huán)境中的差異轉(zhuǎn)錄基因
        1 材料與方法
            1.1 試驗(yàn)菌株、蟲株及其來源
            1.2 工具酶和試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 引物設(shè)計(jì)
            1.5 嗜水氣單胞菌NJ-35基因組DNA的提取
            1.6 生物素標(biāo)記嗜水氣單胞菌NJ-35基因組
            1.7 嗜水氣單胞菌NJ-35 16S rDNA和23S rDNA的擴(kuò)增
            1.8 嗜水氣單胞菌NJ-35 rDNA的擴(kuò)增產(chǎn)物連接pMD19-T vector
            1.9 超聲破碎生物素標(biāo)記的NJ-35基因組DNA和rDNA重組質(zhì)粒
            1.10 四膜蟲捕食嗜水氣單胞菌NJ-35樣品的采集
            1.11 總RNA的提取
            1.12 合成雙鏈cDNA
            1.13 雙擴(kuò)增和回收鏈cDNA
            1.14 選擇性捕獲轉(zhuǎn)錄序列(SCOTS)
            1.15 PCR鑒定SCOTS克隆
            1.16 斑點(diǎn)雜交篩選陽性克隆
            1.17 陽性SCOTS克隆的測(cè)序和分析
            1.18 實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證差異表達(dá)的基因
        2 結(jié)果
            2.1 嗜水氣單胞菌NJ-35基因組的提取
            2.2 嗜水氣單胞菌NJ-35 rDNA的擴(kuò)增及克隆載體的構(gòu)建
            2.3 嗜水氣單胞菌NJ-35基因組DNA及rDNA重組質(zhì)粒的破碎
            2.4 雙鏈cDNA的PCR擴(kuò)增
            2.5 SCOTS結(jié)果
            2.6 差異轉(zhuǎn)錄基因的克隆
            2.7 斑點(diǎn)雜交篩選
            2.8 差異轉(zhuǎn)錄基因的Real-time RT-PCR驗(yàn)證
            2.9 差異轉(zhuǎn)錄基因的分類和功能注釋
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
碩士期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]嗜熱四膜蟲的培養(yǎng)條件優(yōu)化及其擴(kuò)大培養(yǎng)研究[J]. 鐘秋萍,李青,袁冬霞,周志剛,繆煒.  基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2014(02)
[2]淡水養(yǎng)殖魚類暴發(fā)性傳染病致病細(xì)菌的研究[J]. 徐伯亥,殷戰(zhàn),吳玉深,蔡桃珍.  水生生物學(xué)報(bào). 1993(03)
[3]家養(yǎng)鯉科魚暴發(fā)性傳染病的病原研究[J]. 陳懷青,陸承平.  南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 1991(04)

博士論文
[1]魚源無乳鏈球菌感染小鼠巨噬細(xì)胞差異轉(zhuǎn)錄基因的篩選及功能研究[D]. 郭長明.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[2]嗜水氣單胞菌浮游態(tài)和生物被膜狀態(tài)比較蛋白質(zhì)組學(xué)及相關(guān)蛋白特性分析[D]. 王娜.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012

碩士論文
[1]江蘇地區(qū)氣單胞菌分離鑒定及強(qiáng)毒株生物學(xué)特性分析[D]. 胡萌.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]嗜水氣單胞菌在巨噬細(xì)胞內(nèi)存活的相關(guān)基因及其功能研究[D]. 陳文博.集美大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3669069