Toll樣受體（Toll-like receptor,TLR）是天然免疫中重要的模式識(shí)別受體（Pathogen recognized receptor,PRR）。TLR7亞家族是TLRs中重要的成員之一,由TLR7、TLR8和TLR9組成,分布于細(xì)胞內(nèi)涵體,能識(shí)別細(xì)菌或病毒核酸,并通過髓樣分化蛋白88（Myeloid differentiation factor88,My D88）依賴性和β干擾素誘導(dǎo)型含TIR結(jié)構(gòu)域的接頭蛋白（TIR domain-containing adaptor inducing IFN-β,TRIF）依賴性信號(hào)通路,在抗病免疫反應(yīng)中起重要作用。羅非魚（Oreochromis niloticus）是我國淡水養(yǎng)殖的優(yōu)良品種,每年養(yǎng)殖產(chǎn)量約占世界總產(chǎn)量的一半。但近年來的病害問題給我國羅非魚養(yǎng)殖造成重大經(jīng)濟(jì)損失。為了解羅非魚的免疫系統(tǒng),探究其抗病免疫機(jī)制,本研究通過反轉(zhuǎn)錄PCR（reverse transcription PCR,RT-PCR）獲得尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）TLR7亞家族基因及其信號(hào)通路相關(guān)基因TRIF和含TIR結(jié)構(gòu)域接合... 

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 TLR及其信號(hào)通路研究進(jìn)展
    1.2 TLR7亞家族的研究進(jìn)展
    1.3 TRIF和 TIRAP的研究進(jìn)展
    1.4 研究的目的及意義
2 尼羅羅非魚TLR7亞家族基因的克隆和表達(dá)分析
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        2.1.2 RNA提取及cDNA合成
        2.1.3 TLR7、TLR8和TLR9 基因cDNA克隆
        2.1.4 生物信息學(xué)分析
        2.1.5 人工感染無乳鏈球菌
        2.1.6 LPS和 PolyI:C刺激實(shí)驗(yàn)
        2.1.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 尼羅羅非魚總RNA提取
        2.2.2 TLR7、TLR8和TLR9 基因的cDNA序列分析
        2.2.3 TLR7、TLR8和TLR9 與其他物種的氨基酸序列比對(duì)
        2.2.4 TLR7、TLR8和TLR9 與其他物種的同源性比較和系統(tǒng)進(jìn)化分析
        2.2.5 TLR7、TLR8和TLR9 基因在健康個(gè)體中組織表達(dá)分析
        2.2.6 人工感染無乳鏈球菌后TLR7、TLR8和TLR9 mRNA表達(dá)的變化
        2.2.7 LPS刺激后TLR7、TLR8和TLR9 mRNA表達(dá)的變化
        2.2.8 PolyI:C刺激后TLR7、TLR8和TLR9 mRNA的表達(dá)的變化
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
3 尼羅羅非魚TLR7亞家族信號(hào)通路相關(guān)基因的克隆和表達(dá)分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        3.1.2 RNA提取及cDNA合成
        3.1.3 TRIF和 TIRAP基因cDNA克隆
        3.1.4 生物信息學(xué)分析
        3.1.5 人工感染無乳鏈球菌
        3.1.6 LPS和 PolyI:C刺激實(shí)驗(yàn)
        3.1.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 TRIF和 TIRAP基因的cDNA序列分析
        3.2.2 TRIF和 TIRAP與其他物種的氨基酸序列比對(duì)
        3.2.3 TRIF和 TIRAP與其他物種的同源性比較和系統(tǒng)進(jìn)化分析
        3.2.4 TRIF和 TIRAP基因在健康個(gè)體中組織表達(dá)分析
        3.2.5 人工感染無乳鏈球菌后TRIF和 TIRAP mRNA的表達(dá)變化
        3.2.6 LPS刺激后TRIF和 TIRAP mRNA的表達(dá)變化
        3.2.7 PolyI:C刺激后TRIF和 TIRAP mRNA的表達(dá)變化
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
4 尼羅羅非魚TLR7亞家族基因及其信號(hào)通路相關(guān)基因的功能初步分析
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        4.1.2 尼羅羅非魚TLR7、TLR8、TLR9、TRIF和 TIRAP基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.1.3 尼羅羅非魚TLR7、TLR8、TLR9、TRIF和 TIRAP的亞細(xì)胞定位
        4.1.4 雙熒光素酶報(bào)告分析
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 尼羅羅非魚TLR7、TLR8、TLR9、TRIF和 TIRAP基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.2.2 尼羅羅非魚TLR7、TLR8、TLR9、TRIF和 TIRAP的亞細(xì)胞定位
        4.2.3 尼羅羅非魚TLR7、TLR8、TLR9、TRIF和 TIRAP基因過表達(dá)對(duì)NF-κB活性的影響
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
5 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
導(dǎo)師簡介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]赤眼鱒TRIF基因cDNA克隆及其組織表達(dá)分析[J]. 徐瑩,李耀國,王榮華,劉巧林,王靜安,趙鑫,肖調(diào)義.  湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào). 2018(02)
[2]尼羅羅非魚TRIM16和TRIM25基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 鄭建美,高風(fēng)英,盧邁新,劉志剛,曹建萌,可小麗,王淼.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2017(06)
[3]尼羅羅非魚β2m基因的克隆、多態(tài)性分析及組織表達(dá)特征[J]. 高風(fēng)英,盧邁新,黎建平,曹建萌,朱華平,可小麗,劉志剛.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2016(10)
[4]魚類無乳鏈球菌病的研究進(jìn)展[J]. 鄧永強(qiáng),汪開毓.  中國畜牧獸醫(yī). 2016(09)
[5]赤眼鱒Toll樣受體3基因cDNA全長克隆及表達(dá)分析[J]. 肖調(diào)義,李偉,王榮華,劉巧林,彭慧珍,蘇建明.  水生生物學(xué)報(bào). 2016(05)
[6]赤眼鱒MyD88基因cDNA克隆與表達(dá)特性研究[J]. 王榮華,李偉,肖調(diào)義,劉巧林,金生振,周智愚.  水生生物學(xué)報(bào). 2016(03)
[7]接頭分子在TLRs信號(hào)傳導(dǎo)中的作用研究進(jìn)展[J]. 李婷婷,劉陽,蘇永超,杜立銀,王立偉.  河南農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(01)
[8]歐洲鰻鱺MyD88基因的克隆及其免疫功能分析[J]. 姚志剛,馮建軍,王藝?yán)?郭松林,林鵬,張子平,張?jiān)邬i.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2015(03)
[9]尼羅羅非魚MHC Ⅰα全長cDNA的克隆、多態(tài)性及組織表達(dá)特征[J]. 黎建平,高風(fēng)英,盧邁新,曹建萌,朱華平,可小麗,劉志剛.  中國水產(chǎn)科學(xué). 2014(06)
[10]NF-κB信號(hào)通路在魚類先天性免疫中的作用[J]. 楊冰貞,張民,王克堅(jiān).  生物技術(shù)通報(bào). 2014(01)

博士論文
[1]半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis）先天性免疫基因TLR2、TLR7、CD94和Bf的功能研究[D]. 李學(xué)鵬.中國科學(xué)院大學(xué)(中國科學(xué)院海洋研究所) 2017
[2]尼羅羅非魚Toll樣受體信號(hào)通路基因表達(dá)研究[D]. 龐紀(jì)彩.上海海洋大學(xué) 2016

碩士論文
[1]東北七鰓鰻Toll樣受體信號(hào)通路基因表達(dá)研究[D]. 丁少青.上海海洋大學(xué) 2018
[2]團(tuán)頭魴Toll樣受體基因序列分析及其表達(dá)研究[D]. 賴瑞芳.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]卵形鯧鲹TLR7亞家族及其信號(hào)通路相關(guān)基因的克隆與免疫應(yīng)答分析[D]. 孫寶寶.廣西大學(xué) 2016
[4]人TIRAP結(jié)構(gòu)域TIR的克隆、表達(dá)、純化及三維結(jié)構(gòu)模型構(gòu)建[D]. 王兵.福建農(nóng)林大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3655923