Toll樣受體（Toll-like receptor,TLR）是天然免疫中重要的模式識別受體（Pathogen recognized receptor,PRR）。TLR7亞家族是TLRs中重要的成員之一,由TLR7、TLR8和TLR9組成,分布于細胞內(nèi)涵體,能識別細菌或病毒核酸,并通過髓樣分化蛋白88（Myeloid differentiation factor88,My D88）依賴性和β干擾素誘導型含TIR結構域的接頭蛋白（TIR domain-containing adaptor inducing IFN-β,TRIF）依賴性信號通路,在抗病免疫反應中起重要作用。羅非魚（Oreochromis niloticus）是我國淡水養(yǎng)殖的優(yōu)良品種,每年養(yǎng)殖產(chǎn)量約占世界總產(chǎn)量的一半。但近年來的病害問題給我國羅非魚養(yǎng)殖造成重大經(jīng)濟損失。為了解羅非魚的免疫系統(tǒng),探究其抗病免疫機制,本研究通過反轉(zhuǎn)錄PCR（reverse transcription PCR,RT-PCR）獲得尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）TLR7亞家族基因及其信號通路相關基因TRIF和含TIR結構域接合... 

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 TLR及其信號通路研究進展
    1.2 TLR7亞家族的研究進展
    1.3 TRIF和 TIRAP的研究進展
    1.4 研究的目的及意義
2 尼羅羅非魚TLR7亞家族基因的克隆和表達分析
    2.1 實驗材料和方法
        2.1.1 實驗材料和試劑
        2.1.2 RNA提取及cDNA合成
        2.1.3 TLR7、TLR8和TLR9 基因cDNA克隆
        2.1.4 生物信息學分析
        2.1.5 人工感染無乳鏈球菌
        2.1.6 LPS和 PolyI:C刺激實驗
        2.1.7 實時熒光定量PCR
    2.2 結果與分析
        2.2.1 尼羅羅非魚總RNA提取
        2.2.2 TLR7、TLR8和TLR9 基因的cDNA序列分析
        2.2.3 TLR7、TLR8和TLR9 與其他物種的氨基酸序列比對
        2.2.4 TLR7、TLR8和TLR9 與其他物種的同源性比較和系統(tǒng)進化分析
        2.2.5 TLR7、TLR8和TLR9 基因在健康個體中組織表達分析
        2.2.6 人工感染無乳鏈球菌后TLR7、TLR8和TLR9 mRNA表達的變化
        2.2.7 LPS刺激后TLR7、TLR8和TLR9 mRNA表達的變化
        2.2.8 PolyI:C刺激后TLR7、TLR8和TLR9 mRNA的表達的變化
    2.3 討論
    2.4 小結
3 尼羅羅非魚TLR7亞家族信號通路相關基因的克隆和表達分析
    3.1 實驗材料和方法
        3.1.1 實驗材料和試劑
        3.1.2 RNA提取及cDNA合成
        3.1.3 TRIF和 TIRAP基因cDNA克隆
        3.1.4 生物信息學分析
        3.1.5 人工感染無乳鏈球菌
        3.1.6 LPS和 PolyI:C刺激實驗
        3.1.7 實時熒光定量PCR
    3.2 結果與分析
        3.2.1 TRIF和 TIRAP基因的cDNA序列分析
        3.2.2 TRIF和 TIRAP與其他物種的氨基酸序列比對
        3.2.3 TRIF和 TIRAP與其他物種的同源性比較和系統(tǒng)進化分析
        3.2.4 TRIF和 TIRAP基因在健康個體中組織表達分析
        3.2.5 人工感染無乳鏈球菌后TRIF和 TIRAP mRNA的表達變化
        3.2.6 LPS刺激后TRIF和 TIRAP mRNA的表達變化
        3.2.7 PolyI:C刺激后TRIF和 TIRAP mRNA的表達變化
    3.3 討論
    3.4 小結
4 尼羅羅非魚TLR7亞家族基因及其信號通路相關基因的功能初步分析
    4.1 實驗材料和方法
        4.1.1 實驗材料和試劑
        4.1.2 尼羅羅非魚TLR7、TLR8、TLR9、TRIF和 TIRAP基因真核表達載體的構建
        4.1.3 尼羅羅非魚TLR7、TLR8、TLR9、TRIF和 TIRAP的亞細胞定位
        4.1.4 雙熒光素酶報告分析
    4.2 結果與分析
        4.2.1 尼羅羅非魚TLR7、TLR8、TLR9、TRIF和 TIRAP基因真核表達載體的構建
        4.2.2 尼羅羅非魚TLR7、TLR8、TLR9、TRIF和 TIRAP的亞細胞定位
        4.2.3 尼羅羅非魚TLR7、TLR8、TLR9、TRIF和 TIRAP基因過表達對NF-κB活性的影響
    4.3 討論
    4.4 小結
5 全文總結
參考文獻
致謝
作者簡介
導師簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]東北七鰓鰻Toll樣受體信號通路基因表達研究[D]. 丁少青.上海海洋大學 2018
[2]團頭魴Toll樣受體基因序列分析及其表達研究[D]. 賴瑞芳.華中農(nóng)業(yè)大學 2016
[3]卵形鯧鲹TLR7亞家族及其信號通路相關基因的克隆與免疫應答分析[D]. 孫寶寶.廣西大學 2016
[4]人TIRAP結構域TIR的克隆、表達、純化及三維結構模型構建[D]. 王兵.福建農(nóng)林大學 2007



本文編號：3655923