發(fā)布時間：2022-02-21 20:31

　　凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）具有生長速度快、肉質鮮美、抗病力強等優(yōu)點，得以在我國大面積的養(yǎng)殖。然而，隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大，病害問題也日漸凸顯，造成嚴重經濟損失。由于對蝦缺乏獲得性免疫，只能依靠先天免疫系統(tǒng)來抵御病原的入侵。因而從先天免疫途徑入手探究對蝦抗病相關基因為今后凡納濱對蝦養(yǎng)殖的抗病選育奠定基礎。由酚氧化酶（phenoloxidase，PO）、蛋白酶、模式識別蛋白和蛋白抑制劑構成的酚氧化酶原激活系統(tǒng)（prohenoloxidase-activated system，proPO-AS）是甲殼動物重要的識別和防御系統(tǒng)，直接參與對非己信號的識別，通過抑制病原體胞外蛋白酶和幾丁質酶的活性，增強血細胞吞噬作用、形成結節(jié)或包囊以及介導凝集和凝結，產生殺菌物質等，從而在傷口愈合、抑制甚至殺滅病原微生物方面發(fā)揮重要作用。因此，闡明對蝦酚氧化酶原激活系統(tǒng)中關鍵分子的功能對對蝦抗病免疫的研究具有重要的意義。本研究根據同源物種基因序列，設計特異性引物，結合實時熒光定量PCR技術、雙鏈RNA干擾技術、原核表達載體的構建、融合蛋白純化以及生物信息學分析等，克隆了凡納濱對蝦QM和... 

【文章來源】：西北農林科技大學陜西省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 我國凡納濱對蝦養(yǎng)殖的現(xiàn)狀
    1.2 甲殼動物的免疫系統(tǒng)
        1.2.1 器官免疫
        1.2.2 細胞免疫
        1.2.3 體液免疫
    1.3 RNA 干擾技術在對蝦免疫研究中的應用
        1.3.1 dsRNA 的干擾機制
        1.3.2 dsRNA 在免疫基因功能研究中的應用
    1.4 對蝦免疫基因 QM 和 serpin 的研究進展
        1.4.1 QM 基因的研究進展
        1.4.2 Serpin 基因的研究進展
第二章 凡納濱對蝦 QM 基因的功能研究
    2.1 材料和方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 感受態(tài)細胞的制備
        2.1.3 總 RNA 的提取
        2.1.4 cDNA 第一鏈的合成
        2.1.5 LvQM 基因部分 cDNA 序列的獲得
        2.1.6 LvQM 基因的生物信息學分析
        2.1.7 LvQM 基因雙鏈 RNA 的體外合成
        2.1.8 LvQM 基因重組蛋白的表達和純化
        2.1.9 利用實時定量 qRT-PCR 檢測 LvQM 基因的表達量
        2.1.10 雙鏈 RNA 注射后對蝦累積死亡率檢測
        2.1.11 細菌清除試驗
        2.1.12 酚氧化酶活力測定
    2.2 結果和分析
        2.2.1 LvQM 基因的克隆和序列分析
        2.2.2 LvQM 基因氨基酸序列比對和系統(tǒng)進化樹構建
        2.2.3 LvQM 基因的組織差異表達
        2.2.4 LvQM 基因在病菌刺激下的時序表達
        2.2.5 RNA 干擾后相關基因表達量變化
        2.2.6 RNA 干擾后累積死亡率變化
        2.2.7 LvQM 基因重組蛋白的純化
        2.2.8 rLvQM 蛋白對細菌的清除
        2.2.9 LvQM 基因對酚氧化酶活力的調節(jié)
    2.3 討論
第三章 凡納濱對蝦 SERPIN 基因的功能研究
    3.1 材料和方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 Lvserpin 基因部分 cDNA 序列的獲得
        3.1.3 Lvserpin 基因的生物信息學分析
        3.1.4 Lvserpin 基因的組織分布
        3.1.5 不同病原刺激下 Lvserpin 基因的時序表達
        3.1.6 Lvserpin 基因雙鏈 RNA 的體外合成
        3.1.7 注射 Lvserpin dsRNA 后相關基因表達量的檢測
        3.1.8 雙鏈 RNA 注射后對蝦累積死亡率檢測
        3.1.9 Lvserpin 基因重組蛋白的表達和純化
        3.1.10 蛋白酶活性抑制實驗
        3.1.11 細菌生長抑制實驗
        3.1.12 酚氧化酶系統(tǒng)抑制實驗
    3.2 結果和分析
        3.2.1 Lvserpin 基因的克隆和序列分析
        3.2.2 Lvserpin 基因氨基酸序列比對和系統(tǒng)進化樹構建
        3.2.3 Lvserpin 基因的組織分布
        3.2.4 Lvserpin 基因應對不同病原刺激的時序表達
        3.2.5 雙鏈 RNA 對 Lvserpin 基因沉默
        3.2.6 RNA 干擾后相關基因表達量變化
        3.2.7 RNA 干擾后累積死亡率變化
        3.2.8 Lvserpin 基因重組蛋白的表達和純化
        3.2.9 rLvserpin 蛋白對蛋白酶活力的抑制
        3.2.10 rLvserpin 蛋白對細菌生長的抑制
        3.2.11 rLvserpin 蛋白對酚氧化酶激活的抑制
    3.3 討論
第四章 結論、創(chuàng)新點和展望
參考文獻
附錄
縮略詞
致謝
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
[1]2011～2012我國對蝦產業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及展望[J]. 崔和,肖樂.  中國水產. 2012(07)
[2]凡納濱對蝦生物學及養(yǎng)殖生態(tài)學研究進展[J]. 王興強,馬甡,董雙林.  海洋湖沼通報. 2004(04)
[3]世界重要養(yǎng)殖品種——南美白對蝦生物學簡介[J]. 張偉權.  海洋科學. 1990(03)



本文編號：3637993