近年來，羅非魚養(yǎng)殖過程中鏈球菌病頻繁爆發(fā)，嚴(yán)重影響了我國羅非魚產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，目前鏈球菌病防控已成為羅非魚養(yǎng)殖中的重點及難點。無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae）是羅非魚鏈球菌病的主要病原之一。LrrG蛋白是無乳鏈球菌表面較保守的蛋白之一，具有非血清型依耐性，是理想的候選疫苗抗原和免疫檢測靶標(biāo)。為獲得羅非魚源無乳鏈球菌LrrG蛋白并探討其在羅非魚體內(nèi)的免疫原性，本實驗根據(jù)GenBank中已報道的人源無乳鏈球菌LrrG基因序列，設(shè)計特異性引物，擴(kuò)增獲得羅非魚源無乳鏈球菌的LrrG基因；利用NCBI的Conserved domain和PSIPRED分析LrrG蛋白的結(jié)構(gòu)域和二級結(jié)構(gòu)，DNAStar軟件預(yù)測LrrG蛋白能否形成抗原表位；將LrrG基因片段克隆轉(zhuǎn)入原核表達(dá)載體pET-32a（+），構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-32a（+）/LrrG，再導(dǎo)入大腸桿菌BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞，低溫誘導(dǎo)表達(dá)LrrG蛋白；并以LrrG蛋白對羅非魚分別進(jìn)行注射和口服免疫實驗，探究其免疫原性及最佳免疫方式。主要研究結(jié)果與結(jié)論如下：1羅非魚無乳鏈球菌LrrG基因與氨基酸序列分析本實... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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摘要
ABSTRACT
引言
    1 魚類鏈球菌病的研究現(xiàn)狀
    2 無乳鏈球菌的特性及羅非魚受感染特征
    3 漁用疫苗的研究現(xiàn)狀
        3.1 傳統(tǒng)疫苗
        3.2 亞單位疫苗
        3.3 基因工程疫苗
    4 無乳鏈球菌 LrrG 蛋白的研究現(xiàn)狀
        4.1 LRR 蛋白研究概況
        4.2 LrrG 蛋白研究進(jìn)展
    5 緩釋佐劑 PLGA
    6 論文思路和實驗技術(shù)路線
第一章 羅非魚無乳鏈球菌LrrG基因的克隆、原核表達(dá)及LrrG蛋白初步免疫原性分析
    1 材料與方法
        1.1 實驗菌株及試劑
        1.2 引物設(shè)計
        1.3 LrrG 克隆質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.4 LrrG 基因及氨基酸序列分析
        1.5 LrrG 表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.6 LrrG 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
        1.7 LrrG 重組蛋白的親和純化
        1.8 Western blot 分析與蛋白含量測定
        1.9 LrrG 可溶蛋白的免疫、攻毒實驗與血清抗體滴度的檢測
    2 結(jié)果
        2.1 LrrG 基因的克隆與鑒定
        2.2 LrrG 基因及氨基酸序列分析
        2.3 LrrG 重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
        2.4 LrrG 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)和純化
        2.5 LrrG 重組蛋白的 Western blot 分析和蛋白含量測定
        2.6 LrrG 可溶蛋白對羅非魚的免疫保護(hù)效果
        2.7 羅非魚血清抗體水平的 ELISA 分析
    3 討論
第二章 羅非魚無乳鏈球菌PLGA-LrrG蛋白微球的免疫原性研究
    1 材料與方法
        1.1 實驗菌株及實驗動物
        1.2 主要試劑及儀器
        1.3 溶液的配制
        1.4 PLGA-LrrG 蛋白微球的制備和包封率、載藥量測定
        1.5 PLGA-LrrG 蛋白微球體外釋放曲線的測定
        1.6 羅非魚 PLGA-LrrG 蛋白微球的免疫保護(hù)實驗
        1.7 羅非魚免疫指標(biāo)分析
        1.8 統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果
        2.1 PLGA-LrrG 蛋白微球的粒徑、包封率和載藥量
        2.2 PLGA-LrrG 蛋白微球的體外釋放曲線
        2.3 PLGA-LrrG 蛋白微球?qū)α_非魚的免疫保護(hù)效果
        2.4 羅非魚血清抗體水平分析
        2.5 羅非魚溶菌酶活力分析
    3 討論
全文總結(jié)
    1 羅非魚無乳鏈球菌 LrrG 基因的克隆、原核表達(dá)及 LrrG 蛋白初步免疫原性分析
    2 羅非魚無乳鏈球菌 PLGA-LrrG 蛋白微球的免疫原性研究
參考文獻(xiàn)
附錄一 縮略詞表
附錄二 在研期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]羅非魚無乳鏈球菌鑒定及基于cfb和16S rRNA基因同源性分析[J]. 可小麗,盧邁新,李慶勇,霍歡歡,高風(fēng)英,朱華平.  中國農(nóng)學(xué)通報. 2013(20)
[3]羅非魚無乳鏈球菌C5a肽酶的克隆及原核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建[J]. 李慶勇,可小麗,盧邁新,朱華平,高風(fēng)英.  華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2013(04)
[4]海南羅非魚無乳鏈球菌血清型及耐藥性研究[J]. 霍歡歡,可小麗,盧邁新,李慶勇,高風(fēng)英,朱華平,黃樟翰.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2013(05)
[5]幽門螺桿菌BabA蛋白N段的基因克隆、表達(dá)純化及體外粘附活性評價[J]. 高涵,薛利軍,劉小北,冒曉蓓,任麗麗,耿建,戴婷婷,于鋒,褚曉源.  中國生物工程雜志. 2013(03)
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本文編號：3630513