本文分析了三種E3泛素連接酶,Nrdp1、March4和Rnf115的分子結(jié)構(gòu)特征,研究了這些基因的組織表達譜及其在大黃魚免疫反應(yīng)中的表達,應(yīng)用酵母雙雜交研究了Nrdp1的互作蛋白。結(jié)果如下:（1）大黃魚Nrdp1基因（Lc Nrdp1）的cDNA全長1248 bp,ORF為957 bp,編碼318個氨基酸,其編碼蛋白主要結(jié)構(gòu)包括N-端的環(huán)指結(jié)構(gòu)、中間的B-box結(jié)構(gòu)和C-端的螺旋卷曲3個結(jié)構(gòu)域,分子量約為36.16 KDa。Real-time PCR分析發(fā)現(xiàn),Nrdp1廣泛表達在大黃魚的腦、心臟、鰓、肝臟、脾臟、腎臟、頭腎、胃、腸、皮膚、肌肉和血液組織中,其中腦表達豐度最高。用孵化2 h內(nèi)的刺激隱核蟲感染大黃魚,采集6h、12h、1d、2d、3d和5d的樣品,Real-time PCR檢測在鰓、皮膚、脾和腎中的的表達。結(jié)果表明:Nrdp1在鰓、皮膚和脾臟中表達出現(xiàn)顯著上調(diào)（P<0.05）,且都在刺激后12h表達量達到最高值;在頭腎中Nrdp1基因的表達量下降。酵母雙雜交實驗表明,Nrdp1與MyD88、TBK1之間存在著相互作用。腹腔注射PBS、LPS、poly I:C和副溶血... 

【文章來源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

酵母雙雜交原理圖

TGAAGGAGTAGCCACGCTCTGT量 PCR織差異表達分析結(jié)果，利用 Fold = 2–ΔΔCT 計算基因的 RQ 值，A 和 Independent-Samples T-test 方法)分析各組數(shù)p1的克隆與序列分析NA 的提取 RNA 經(jīng) 1.0%瓊脂糖凝膠電泳后，可以清楚的rRNA 及亮度較微弱的 5S rRNA 帶（圖 2.1），驗。

圖 2.2 Nrdp1 PCR 產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖g 2.2 The electropherogram of Nrdp1 PCR frag1：Nrdp1 PCR 產(chǎn)物 M：Marker 2000cDNA 序列分析p1 基因片段進行序列拼接（如圖 2.3） bp，預(yù)測其編碼蛋白的分子量為 36.1CGTGGCTCCCAGTGATGTACCatggggtacgacgttacM G Y D V T gaagacctgctgtgccctatatgtagtggagtcctcgaE D L L C P I C S G V L E tgcgagcatgctttctgcaacgcctgtataacgcagtgC E H A F C N A C I T Q W ccagtcgatcgcacagtagtgacgctagctcacctccgP V D R T V V T L A H L R aacatgctgtccaagctccagatcagctgcgacaacgcN M L S K L Q I S C D N A ctacggctcgaccagctgcagtcgcacctcaaggactg

【參考文獻】：
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本文編號：3628621