發(fā)布時間：2022-01-24 14:43

　　本研究以十足目虹彩病毒（Decapod iridescent virus 1, DIV1）主要衣殼蛋白基因為靶序列設(shè)計引物,建立了DIV1的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP）檢測方法,并以pMD18-DIV1質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品為模板對該方法的檢測靈敏度、檢測特異性等進行了評估。結(jié)果顯示,此方法最適反應(yīng)溫度為64.4℃,優(yōu)化后的25μl反應(yīng)體系中包含2.5μl 10×Isothermal amplification buffer、4.0 mmol/L Mg²⁺、1.2 mmol/L dNTPs、6.4 U Bst 2.0 WarmStart^? DNA聚合酶、0.8μmol/L EvaGreen^?和4.4μl ddH₂O。該方法檢測靈敏度下限為3.54×10²拷貝/反應(yīng);與蝦肝腸胞蟲（EHP）、致急性肝胰腺壞死病副溶血弧菌(Vp_AHPND)、對蝦偷死野田村病毒（CMNV）、傳染性皮下及造血組織壞死... 

【文章來源】：漁業(yè)科學(xué)進展. 2020,41(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

十足目虹彩病毒(DIV1) LAMP反應(yīng)體系的優(yōu)化

十足目虹彩病毒(DIV1) LAMP方法以p MD18-DIV1質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品為模板產(chǎn)生的擴增曲線(a)和標(biāo)準(zhǔn)曲線(b)

以DIV1、EHP、VpAHPND、CMNV、IHHNV、WSSV、TSV和YHV等主要蝦類病原DNA或c DNA為模板進行DIV1-LAMP檢測的特異性分析，結(jié)果顯示，只有當(dāng)檢測樣品含有DIV1陽性核酸時，擴增反應(yīng)才產(chǎn)生“S”形擴增曲線，其他病原的核酸均無陽性擴增曲線(圖3)。該結(jié)果說明，本研究建立的DIV1-LAMP方法與上述其他常見的對蝦病原無交叉反應(yīng)，可特異性檢測DIV1。2.4 DIV1-LAMP方法可重復(fù)性和可重現(xiàn)性分析

【參考文獻】：
期刊論文
[1]2016～2017年中國沿海省市蝦類偷死野田村病毒（CMNV）分子流行病學(xué)調(diào)查[J]. 李小平,萬曉媛,張慶利,黃倢,董宣,王秀華,邱亮,宋增磊,程東遠.  漁業(yè)科學(xué)進展. 2019(02)

博士論文
[1]養(yǎng)殖對蝦的病毒宏基因組分析及蝦血細胞虹彩病毒（Shrimp hemocyte iridescent virus,SHIV）的分子流行病學(xué)研究[D]. 邱亮.上海海洋大學(xué) 2018
[2]大鯢虹彩病毒病病原的分離、鑒定、基因組測序及大鯢群體遺傳多樣性分析[D]. 孟彥.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013

碩士論文
[1]十足目虹彩病毒1（DIV1）的易感宿主調(diào)查[D]. 陳形.上海海洋大學(xué) 2019
[2]兩種對蝦新發(fā)病毒核酸檢測技術(shù)的建立及應(yīng)用[D]. 李小平.上海海洋大學(xué) 2018
[3]實時熒光定量PCR在凡納濱對蝦病原VPAHPND及SHIV檢測中的應(yīng)用[D]. 陳蒙蒙.上海海洋大學(xué) 2017



本文編號：3606763