DNA甲基化修飾是真核生物最常見的表觀遺傳現(xiàn)象之一,是一種可逆的過程,能夠直接影響到基因的活性。越來越多的實驗證明DNA甲基化在水產(chǎn)動物的生長發(fā)育中起著舉足輕重的作用。因此,研究DNA甲基化修飾是從分子學角度研究水產(chǎn)動物各種生理現(xiàn)象的關(guān)鍵。黃鱔具有性逆轉(zhuǎn)的特點,對于黃鱔的性別相關(guān)基因我們選擇了Dtmrt基因、Sox基因和Vasa基因。這三組基因已經(jīng)證實在魚類雌雄性腺中存在表達差異。黃鱔的Dmrt2、Dmrt3、Dmrt4基因編碼的mR_NA全長分別為1680bp、413bp和1772bp,分別編碼526、470、420個氨基酸;而Sox9al和Sox17基因的mRNA全長分別為1625bp和1775bp,編碼氨基酸數(shù)量為482和399個；Vasa基因的mRNA全長2267bp,編碼氨基酸618個。由于基因甲基化的開啟或關(guān)閉先于基因表達產(chǎn)生差異,我們通過比較這些基因的甲基化在雌雄性腺以及其他組織中甲基化狀態(tài)就可以簡單了解這些基因的開關(guān)狀況以及合適開關(guān)。本實驗用甲基化敏感的限制性內(nèi)切酶Hpa Ⅱ酶切黃鱔的雌雄性腺以及其他組織的DNA后,找到合適的擴增條件,根據(jù)已知的mR... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 綜述
    1 引言
    2 DNA甲基化
    3 DNA甲基化的研究方法
        3.1 甲基化敏感的限制性內(nèi)切酶方法
        3.2 亞硫酸氫鹽法
            3.2.1 甲基化特異PCR法(MSP)
            3.2.2 DNA甲基化熒光PCR檢測
            3.2.3 結(jié)合亞硫酸氫鹽處理的酶解分析法(CO-BRA)
            3.2.4 甲基化敏感性高分辨率熔解(MS-HRM)
            3.2.5 甲基化敏感的單核苷酸的擴增(Ms-SnuPE)
        3.3 甲基化檢測芯片技術(shù)
            3.3.1 差式甲基化雜交法(DMH)
            3.3.2 甲基化特異性寡核苷酸芯片(methylation specific oligonucleotide microarray,MSO microarray)
            3.3.3 高效液相色譜(HPLC)法
    4 DNA甲基化對基因表達的調(diào)控
    5 DNA甲基化在水產(chǎn)動物育種中的應用
        5.1 甲基化敏感擴增多態(tài)性技術(shù)在水產(chǎn)動物上的應用
        5.2 DNA甲基化與雜種優(yōu)勢
        5.3 DNA甲基化與分子標記
    6 國內(nèi)外研究進展
    7 本課題的研究目的及意義
第二章 Dmrt、Sox、Vasa基因克隆及甲基化序列分析
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗儀器
        1.3 實驗試劑
    2 實驗方法
        2.1 總DNA的提取
        2.2 引物設(shè)計
            2.2.1 Dmrt基因的引物設(shè)計
            2.2.2 Sox基因的引物設(shè)計
            2.2.3 Vasa基因的引物設(shè)計
        2.3 黃鱔性別相關(guān)基因的酶切
        2.4 黃鱔性別相關(guān)基因酶切產(chǎn)物的擴增
        2.5 擴增產(chǎn)物電泳分離
    3 實驗結(jié)果
        3.1 Dmrt基因的甲基化分析
            3.1.1 黃鱔各組織中Dmrt2基因的酶切結(jié)果
            3.1.2 黃鱔各組織中Dmrt3基因的酶切結(jié)果
            3.1.3 黃鱔各組織中Dmrt4基因的酶切結(jié)果
            3.1.4 黃鱔Dmrt基因的甲基化分析
        3.2 Sox基因的甲基化分析
            3.2.1 黃鱔各組織中Sox9a1基因的酶切結(jié)果
            3.2.2 黃鱔各組織中Sox17基因的酶切結(jié)果
            3.2.3 黃鱔Sox基因的甲基化分析
        3.3 Vasa基因的甲基化分析
            3.3.1 黃鱔各組織中Vasa基因的酶切結(jié)果
            3.3.2 黃鱔Vasa基因的甲基化分析
    4 分析與討論
    5 小結(jié)
第三章 黃鱔Dmrt3基因在雌雄性腺中的甲基化差異
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗儀器
        1.3 實驗試劑
    2 實驗方法
        2.1 精巢和卵巢總DNA的提取
        2.2 精巢和卵巢Dmrt3-FR2的酶切
        2.3 精巢和卵巢Dmrt3-FR2酶切產(chǎn)物的擴增
        2.4 擴增產(chǎn)物電泳分離
    3 實驗結(jié)果
    4 分析與討論
    5 小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻
致謝
科研情況


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]性別相關(guān)基因在牙鲆性腺分化和性別表型形成中的遺傳學分析[D]. 文愛韻.中國科學院研究生院（海洋研究所） 2010



本文編號：3605544