Ajuba屬于LIM蛋白第三類中的Zyxin蛋白家族,含有雙鋅指結構的LIM結構域,其主要作用是參與蛋白質之間的相互作用。Ajuba影響著生物體生長發(fā)育的基本過程——有絲分裂,調控細胞周期;是細胞骨架相關蛋白,參與細胞粘附及細胞間的信息交流;作為轉錄共抑制因子,參與調解不同的生理過程,甚至與腫瘤的發(fā)生相關。而且,Ajuba參與核轉錄因子蛋白家族NF-κB的激活反應,NF-κB能夠調控很多與早期免疫反應和炎癥反應相關的分子。草魚呼腸孤病毒引發(fā)的草魚出血病,危及中國淡水養(yǎng)殖業(yè),給漁民造成極大的損失。針對草魚呼腸孤病毒分子結構及基因功能的研究是明確病毒侵染宿主機制的基礎,而對草魚呼腸孤病毒蛋白與宿主蛋白的相互作用研究則是攻克草魚出血病的重點和難點�；诖�,本課題主要從以下幾個方面進行研究:1.草魚Ajuba基因的克隆與表達根據酵母雙雜交技術獲得的基因片段設計特異性引物,結合RACE技術,擴增得到草魚Ajuba基因（gc Ajuba）c DNA全長3980 bp,Gen Bank登錄號為KC551289.1。其中,5’非編碼區(qū)1215 bp,3’非編碼區(qū)644 bp,開放閱讀框（ORF）212... 

【文章來源】：上海海洋大學上海市

【文章頁數】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

LIM蛋白分類圖示（ZhengandZhao,2007）

關分子（PAMPs）的存在。PRRs 中的 TLRs 和 RLRs 具有識別分子的作用。在病毒組分激活作用下，TLRs 或 RLRs 將信號傳，再通過逐級傳遞，使干擾素調控因子(IRFs)進一步激活干擾素號途徑。隨后，引發(fā) IFN-I 與 ISGs 介導的第一層抗病毒防御機呼腸孤病毒 (Grass carp reovirus，GCRV)，也稱之為草魚出血病的第一種魚類病毒[62]，相對于水生呼腸孤病毒屬中其它病毒，[44]，其引起的草魚出血病具有高傳染性、高致死性等特點，嚴的發(fā)展[43]。針對草魚出血病防控的探究一直是我國淡水魚類病RV 對酸（pH 3）、堿（pH 10）、溫度等環(huán)境和乙醚、氯仿等化學定性[49]。圖 1-2 為草魚呼腸孤病毒的電鏡照片及結構。GCRV 由糖蛋白組成，是雙鏈 RNA 病毒，共有 11 條 dsRNA 編碼 12 個構蛋白（VP1-VP7）和 5 個非結構蛋白（NS80、NS31、NS1645]。表 1-2 總結了 GCRV 各基因編碼蛋白大小及功能。

2.1 草魚 Ajuba 基因 cDNA 全長基于酵母雙雜交實驗，設計Ajuba特異性引物gcAjuba-F1和gcAjuba-R1，利用溫度梯度PCR技術，擴增得到草魚cDNA片段為1091 bp（圖2-1），應用5’RACE技術得到基因序列長度為2548 bp（圖2-2），同樣地，3’RACE技術得到基因序列長度為1632 bp（圖2-3）。結論，利用RACE技術獲得草魚Ajuba基因cDNA序列全長為3980 bp，上傳至GenBank，登錄號為KC551289.1。使用DNAssist軟件及在線工具ORF Finder分析得知，gcAjuba cDNA包含5'端非翻譯區(qū)（5′UTR）1215 bp，完整的編碼序列和3'端非翻譯區(qū)（3′UTR）644 bp。其開放閱讀框（ORF）序列為2121 bp

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]稻瘟病菌四個LIM蛋白編碼基因及Gγ亞基編碼基因的生物學功能研究[D]. 李亞.浙江大學 2013
[2]HIV-1 Vpr激活細胞NF-κB信號通路分子機制的研究[D]. 劉瑞康.南開大學 2013

碩士論文
[1]草魚呼腸孤病毒拮抗宿主細胞RNA干擾信號通路的機制研究[D]. 沈曉寶.上海海洋大學 2014
[2]草魚呼腸孤病毒混合感染及其致細胞病變效應的蛋白組學分析[D]. 王土.上海海洋大學 2013
[3]草魚呼腸孤病毒人工感草魚的條件篩選和病理學研究[D]. 肖雪.四川農業(yè)大學 2007



本文編號：3605518