三角帆蚌（Hypriosis cumingii）是我國(guó)主要的淡水育珠蚌，其每年的淡水珍珠產(chǎn)量占世界的95%以上。研究三角帆蚌珍珠形成相關(guān)基因的功能對(duì)珍珠形成機(jī)制研究具有重要意義。通過三角帆蚌轉(zhuǎn)錄組測(cè)序得到的信息，篩選出2個(gè)perlucin基因和BMP7基因部分基因序列，采用RACE技術(shù)得到3個(gè)基因cDNA全長(zhǎng)序列。為研究這3個(gè)基因的功能，首先對(duì)7個(gè)管家基因進(jìn)行穩(wěn)定性分析，最終得到3個(gè)合適的內(nèi)參基因。利用熒光定量技術(shù)對(duì)3個(gè)基因在不同組織中、貝殼修復(fù)過程中及早期珍珠形成過程中表達(dá)量進(jìn)行分析，利用原位雜交技術(shù)對(duì)基因在外套膜的表達(dá)進(jìn)行定位分析。嘗試將Hc-perlucin1蛋白在原核系統(tǒng)中進(jìn)行表達(dá)。主要的研究結(jié)果如下：（1）三角帆蚌內(nèi)參基因的篩選對(duì)β-actin、β-tubulin、elongation factor1alpha（EF1α）、GAPDH、ubiquitin、ribosomal protein L18（Rpl18）以及cyclophilin共7個(gè)管家基因，采用BestKeeper，geNorm和NormFinder軟件分析了其在不同組織間、不同季節(jié)外套膜、貝殼修復(fù)過程和早期珍珠形... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

基于NormFinder軟件評(píng)估的七個(gè)候選內(nèi)參基因穩(wěn)定性數(shù)值：（COND1）不同組織，（COND2）春季外套膜，（Cond3）秋季外套膜，（Cond4）貝殼修復(fù)過程，（COND5）插核后珍珠囊

17個(gè)軟件分析，候選內(nèi)參基因穩(wěn)定性的排序一致。TUB的穩(wěn)定性最低，而Ubi的穩(wěn)定性最高（圖2-1（cond5）和圖2-2（E））。根據(jù)geNorm的分析，V2/3的值是0.00，這說明只需要2個(gè)內(nèi)參基因校正。最好的組合是EF1 和Ubi（圖2-2（E））。表 2-6：基于 BestKeeper 軟件循環(huán)閾值點(diǎn)值（Ct）對(duì)候選內(nèi)參基因在插核后珍珠囊表達(dá)水平統(tǒng)計(jì)與和分析Table 2-6: Descriptive statistics and expression level analyses of the tested candidate referencegenes in pearl sac post saibo implanting based on their threshold cycle point values (Ct) as providedby BestKeeper softwareFactor RPL18 ACTB TUBB Cycl EF1α GAPDH UbiqN 11 11 11 11 11 11 11GM [Ct] 18.59 17.22 18

圖 3-1：三角帆蚌 perlucin1 基因全長(zhǎng) CDNA 序列及推導(dǎo)的氨基酸序列。下劃線為信號(hào)肽，方框?yàn)槠鹗济艽a子。Fig 3-1: Full-length cDNA and predicted protein sequence of the Hyriopsis cumingii perlucin1 gene.Nucleoti des and amino acids are numbe red to the right of the sequence. The initiator codon (ATG)is shown in the square and the stop codon (TGA) is indicated by an asterisk. Amino acid residues ofsignal peptide are underlined.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3595478