羅非魚廣泛分布于熱帶、亞熱帶的淡水和咸淡水水域,具有肉質(zhì)細(xì)嫩、生長快速、繁殖力強(qiáng)等特點(diǎn),1976年被聯(lián)合國糧農(nóng)組織作為優(yōu)良品種向全世界推廣養(yǎng)殖。然而自2008年以來,無乳鏈球菌�。⊿treptococcus agalactiae）每年都會給我國的羅非魚養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前,該病尚無有效的防治措施。拮抗菌可通過與病原菌競爭性粘附到水產(chǎn)動物體表及與外界相通的腔道,抑制病原菌對水產(chǎn)動物的粘附作用,從而阻斷病原菌對宿主的侵襲,達(dá)到預(yù)防疾病的目的。因此,本文通過優(yōu)化檢測條件,建立了檢測無乳鏈球菌的間接ELISA方法,進(jìn)而研究了無乳鏈球菌對羅非魚粘液的粘附特性,以及無乳鏈球菌對羅非魚體表、鰓及腸道粘液的粘附情況,利用從不同環(huán)境中篩選得到的59株無乳鏈球菌拮抗菌,研究了拮抗菌通過競爭、置換和排斥作用對無乳鏈球菌粘附羅非魚不同部位粘液的拮抗效果,最后結(jié)合安全性試驗(yàn)從中篩選到2株對無乳鏈球菌具有顯著拮抗粘附作用的菌株,具體研究結(jié)果如下：本文建立的檢測無乳鏈球菌的間接ELISA試驗(yàn)方法最適條件如下：利用10%的小牛血清封閉作用60min,1：100的一抗?jié)舛?7℃條件下作用1h,1：2000的二... 

【文章來源】：海南大學(xué)海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 綜述
    1 羅非魚無乳鏈球菌疾病
        1.1 羅非魚養(yǎng)殖概況
        1.2 羅非魚無乳鏈球菌疾病
        1.3 無乳鏈球菌流行病學(xué)
        1.4 致病機(jī)理
        1.5 毒力因子
    2 羅非魚無乳鏈球菌防治方法
        2.1 改善養(yǎng)殖環(huán)境
        2.2 抗生素
        2.3 中草藥
        2.4 疫苗
        2.5 益生菌
            2.5.1 益生菌的作用機(jī)制
            2.5.2 益生菌對水產(chǎn)動物所起的作用
            2.5.3 益生菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用
    3 粘附作用
        3.1 粘附的影響因素
            3.1.1 細(xì)菌的起始粘附濃度
            3.1.2 細(xì)菌本身的活力
            3.1.3 細(xì)菌的粘附作用時(shí)間
            3.1.4 溫度
            3.1.5 相關(guān)離子濃度
            3.1.6 pH值
            3.1.7 其他影響因素
        3.2 粘附素
            3.2.1 菌毛粘附素
            3.2.2 非菌毛粘附素
        3.3 拮抗粘附
    4 本文的目的意義
第二章 無乳鏈球菌對羅非魚粘液粘附特性研究
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 主要試劑與儀器
            1.2.1 主要試劑及其配制
            1.2.2 主要儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 菌液制備
            1.3.2 羅非魚粘液的制備
            1.3.3 無乳鏈球菌間接ELISA檢測方法的建立
            1.3.4 無乳鏈球菌對羅非魚粘液粘附特性的研究
            1.3.5 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果
        2.1 無乳鏈球菌間接ELISA法試驗(yàn)條件的優(yōu)化
            2.1.1 小牛血清作用濃度
            2.1.2 小牛血清作用時(shí)間
            2.1.3 一抗作用濃度
            2.1.4 一抗作用時(shí)間
            2.1.5 一抗作用溫度
            2.1.6 二抗作用濃度
            2.1.7 二抗作用時(shí)間
            2.1.8 顯色反應(yīng)時(shí)間
            2.1.9 顯色反應(yīng)溫度
        2.2 無乳鏈球菌對羅非魚粘液的粘附特性
            2.2.1 菌濃度對無乳鏈球菌粘附作用的影響
            2.2.2 粘液作用濃度對無乳鏈球菌粘附作用的影響
            2.2.3 粘液作用時(shí)間對無乳鏈球菌粘附作用的影響
            2.2.4 不同部位粘液對無乳鏈球菌粘附作用的影響
            2.2.5 粘附時(shí)間對無乳鏈球菌粘附作用的影響
            2.2.6 溫度對無乳鏈球菌粘附作用的影響
            2.2.7 pH值對無乳鏈球菌粘附作用的影響
            2.2.8 鹽度對無乳鏈球菌粘附作用的影響
    3 討論
第三章 無乳鏈球菌拮抗菌的分離、鑒定及多樣性分析
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 主要試劑與儀器
            1.2.1 主要試劑及其配制
            1.2.2 主要儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 實(shí)驗(yàn)樣品的采集
            1.3.2 細(xì)菌的分離與培養(yǎng)
            1.3.3 拮抗菌的篩選
            1.3.4 拮抗菌的安全性試驗(yàn)
            1.3.5 16S rDNA鑒定
    2 結(jié)果
        2.1 拮抗菌的篩選
        2.2 拮抗菌的安全性試驗(yàn)
        2.3 16S rDNA基因序列分析和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建
    3 討論
第四章 拮抗菌對無乳鏈球菌粘附羅非魚粘液的影響
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 主要試劑與儀器
            1.2.1 主要試劑及其配制
            1.2.2 主要儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)方法
            1.3.1 菌液制備
            1.3.2 羅非魚粘液的制備
            1.3.3 拮抗菌對無乳鏈球菌粘附粘液的影響
            1.3.4 處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
    2 結(jié)果
        2.1 拮抗菌對無乳鏈球菌粘附羅非魚的粘附競爭
            2.1.1 體表粘液
            2.1.2 鰓粘液
            2.1.3 腸道粘液
        2.2 拮抗菌對無乳鏈球菌粘附羅非魚的粘附置換
            2.2.1 體表粘液
            2.2.2 鰓粘液
            2.2.3 腸道粘液
        2.3 拮抗菌對無乳鏈球菌粘附羅非魚的粘附排斥
            2.3.1 體表粘液
            2.3.2 鰓粘液
            2.3.3 腸道粘液
    3 討論
參考文獻(xiàn)
作者在讀期間論文發(fā)表及參研課題情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]測定無乳鏈球菌滅活疫苗濃度的分光光度法[J]. 張晗,周永燦,趙光軍,蔡巖,謝珍玉,郭偉良,王世鋒.  熱帶生物學(xué)報(bào). 2013(04)
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[3]羅非魚鏈球菌病疫苗的研究進(jìn)展[J]. 吳南,郭佳,熊麗,張永安.  南方水產(chǎn)科學(xué). 2013(06)
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[9]羅非魚源無乳鏈球菌ZQ0910轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子rovS基因的克隆及表達(dá)研究[J]. 王蓓,簡紀(jì)常,魯義善,蔡雙虎,黃郁蔥,湯菊芬,李桂歡,吳灶和.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2013(04)
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碩士論文
[1]羅非魚無乳鏈球菌病DNA疫苗的研究及有效中草藥的篩選[D]. 劉亮.中山大學(xué) 2013
[2]無乳鏈球菌FbsA和α-enolase基因的克隆、表達(dá)及其免疫效果研究[D]. 易婷.中山大學(xué) 2013
[3]海南羅非魚鏈球菌病病原分離鑒定及防治中草藥篩選[D]. 鄧恒為.海南大學(xué) 2013
[4]廣西羅非魚鏈球菌的分離鑒定、藥敏試驗(yàn)與病理學(xué)研究[D]. 柒壯林.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[5]病原性河流弧菌對青石斑魚的粘附定植作用研究[D]. 趙敏慧.集美大學(xué) 2009



本文編號：3592880