雜色鮑幼蟲的附著變態(tài)過程,是其生活史中至關重要的時期。該時期的幼蟲敏感而脆弱,死亡率高,直接關系到其種群分布、數(shù)量變動。本研究在實驗室構建的雜色鮑EST數(shù)據(jù)庫的基礎上,采用SMART-RACE技術共成功克隆得到3條胰島素超家族基因:胰島素樣生長因子結合蛋白4（insulin-like growth binding protein 4,IGFBP4）、胰島素樣生長因子結合蛋白5（insulin-like growth binding protein 5,IGFBP5）和胰島素樣蛋白（molluscan insulin-like peptide,MIRP）基因的cDNA,分別命名為hdIGFBP4、hdIGFBP5、hdMIRP。連同實驗室已克隆到的雜色鮑胰島素樣生長因子結合蛋白7（insulin-like growth binding protein 7,IGFBP7）（hdIGFBP7）,采用實時定量PCR（qPCR）和基因沉默等技術分析上述基因在雜色鮑幼蟲附著變態(tài)過程中的作用。主要的研究結果如下:1)hdIGFBP4 cDNA全長為584 bp,為無脊椎動物中首次克隆到IGFBP4基... 

【文章來源】：集美大學福建省

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 雜色鮑的養(yǎng)殖現(xiàn)狀及幼蟲研究
    1.2 無脊椎動物幼蟲附著變態(tài)的研究進展
        1.2.1 鮑幼蟲發(fā)育研究
        1.2.2 海洋無脊椎動物幼蟲附著變態(tài)的研究進展
    1.3 IGFs系統(tǒng)及胰島素樣蛋白概述
        1.3.1 IGF信號通路研究進展
        1.3.2 IGFBP4的研究進展
        1.3.3 IGFBP5的研究進展
        1.3.4 IGFBP7的研究進展
        1.3.5 無脊椎動物胰島素樣生長因子研究進展
    1.4 本研究的目的與意義
    1.5 主要研究內(nèi)容和技術路線
        1.5.1 主要研究內(nèi)容
        1.5.2 主要技術路線
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要儀器和試劑
        2.1.3 引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 總RNA的提取 (TRIzol法) 和去除DNA的污染
        2.2.2 合成RT-PCR cDNA第一鏈和PCR擴增獲取基因cDNA片段
        2.2.3 SMART-RACE技術獲取基因全長
        2.2.4 割膠純化基因片段
        2.2.5 與質粒載體連接
        2.2.6 感受態(tài)細胞的轉化及篩選
        2.2.7 質粒插入片段的檢測
        2.2.8 質粒測序
        2.2.9 目的基因的生物信息學分析
        2.2.10 實時熒光定量PCR (Real-time PCR) 反應體系及條件
        2.2.11 RNAi實驗
        2.2.12 原核表達
第3章 結果
    3.1 雜色鮑各組織總RNA的抽提結果
    3.2 RACE-PCR擴增結果
    3.3 hdIGFBP4、5、7、hdMIRP生物信息學分析
        3.3.1 hdIGFBP4 生物信息學分析
        3.3.2 hdIGFBP5 生物信息學分析
        3.3.3 hdIGFBP7 生物信息學分析
        3.3.4 hdMIRP 生物信息學分析
    3.4 雜色鮑 hdIGFBP4、hdIGFBP5、hdIGFBP7、hdMIRP 基因的表達特征
        3.4.1 RNAi技術干擾hdIGFBP4、hdIGFBP5、hdIGFBP7、hdMIRP基因幼蟲的附著率與死亡率
        3.4.2 RNAi后hdIGFBP4、hdIGFBP5、hdIGFBP7、hdMIRP基因的表達情況
        3.4.3 干擾后，胰島素/胰島素樣蛋白/胰島素樣生長因子結合蛋白相關通路的表達情況
    3.5 原核表達
        3.5.1 重組表達載體pET-22b-IGFBP4/IGFBP5/IGFBP7/MIRP的構建及表達
        3.5.2 重組表達載體pET-32a-IGFBP4/IGFBP5/IGFBP7/MIRP的構建及表達
        3.5.3 密碼子預測分析
第4章 討論
    4.1 胰島素樣生長因子結合蛋白 4
    4.2 胰島素樣生長因子結合蛋白 5
    4.3 胰島素樣生長因子結合蛋白 7
    4.4 胰島素樣蛋白
第5章 結論與展望
致謝
參考文獻
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【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3583429