本研究以青鱂為模式生物研究半滑舌鰨性別分化相關(guān)基因的表達(dá)情況，為海水魚基因功能研究提供了新的思路。本研究從三個(gè)方面進(jìn)行闡述：一是異源和同源dmrt1基因過表達(dá)載體構(gòu)建；二是異源和同源dmrt1基因過表達(dá)載體在青鳉體內(nèi)的整合和表達(dá)分析；三是olcsw1Talen載體在青鱂體內(nèi)基因敲除分析。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1.異源和同源dmrt1基因過表達(dá)載體構(gòu)建。提取半滑舌鰨和青鱂精巢組織RNA，并進(jìn)行RT-PCR反轉(zhuǎn)錄獲得大量cDNA，通過BamHⅠ和XhoⅠ進(jìn)行雙酶切，與同樣經(jīng)過這兩種酶雙酶切的pIRES-hrGFP-1a載體進(jìn)行連接，啟動(dòng)子為巨噬細(xì)胞病毒（CMV）啟動(dòng)子，分別構(gòu)建含有半滑舌鰨和青鱂dmrt1基因的過表達(dá)載體。分別命名為：pIRES-Csdmrt1-hrGFP-1a和pIRES-Oldmrt1-hrGFP-1a。通過質(zhì)粒提取獲得大量過表達(dá)載體質(zhì)粒溶液。2.異源和同源dmrt1基因過表達(dá)載體在青鳉體內(nèi)的整合和表達(dá)分析。采用顯微注射的方式將兩種過表達(dá)載體稀釋至30ng/μl,分別導(dǎo)入到青鱂1細(xì)胞受精卵中，比較異源和同源dmrt1基因?qū)η圜毰咛シ趸实挠绊懸约皟煞Ndmrt1基因在青鳉體內(nèi)... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

顯微注射操作過程

2.2.2.3 Talen 載體構(gòu)建通過克隆得到的青鱂 olcsw1，我們進(jìn)一步分析該基因結(jié)構(gòu)，并在處設(shè)計(jì) Talen 基因靶向敲除位點(diǎn)(圖 2-3)，載體由香港中文大學(xué)構(gòu)建。

上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文小 量 制 備 ， 將 制 備 好 的 半 滑 舌 鰨 和 青 鱂 質(zhì) 粒 載 體 分 別 命 名 為pIRES-Csdmrt1-hrGFP-1a 和 pIRES-Oldmrt1-hrGFP-1a（圖 2-4）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]一種新型轉(zhuǎn)基因斑馬魚毒物檢測(cè)系統(tǒng)的建立[J]. 紀(jì)喜文,田雪,徐殿勝.  化學(xué)與生物工程. 2010(09)
[2]Integration mechanisms of transgenes and population fitness of GH transgenic fish[J]. HU Wei & ZHU ZuoYan* State Key Laboratory of Freshwater Ecology and Biotechnology, Institute of Hydrobiology, Chinese Academy of Sciences, Wuhan 430072, China.  Science China（Life Sciences）. 2010(04)
[3]轉(zhuǎn)大麻哈魚生長(zhǎng)激素基因鯉食用安全毒性分析[J]. 梁利群,王靜,曹頂臣,王曉軍,閆學(xué)春,常玉梅,孫效文.  食品科學(xué). 2010(05)
[4]魚類轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 穆楠,李海燕,李萬良.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2008(30)
[5]快速生長(zhǎng)導(dǎo)致轉(zhuǎn)“全魚”生長(zhǎng)激素基因鯉魚臨界游泳速度的降低[J]. 李德亮,傅萃長(zhǎng),胡煒,鐘山,汪亞平,朱作言.  科學(xué)通報(bào). 2007(08)
[6]轉(zhuǎn)大麻哈魚生長(zhǎng)激素基因鯉生態(tài)安全性檢測(cè)與分析[J]. 耿波,梁利群,關(guān)云濤,孫效文,雷清泉,歐陽紅生.  生態(tài)學(xué)報(bào). 2007(03)
[7]魚類轉(zhuǎn)基因技術(shù)綜述[J]. 吳勇,區(qū)又君.  海洋通報(bào). 2006(06)
[8]魚類性腺發(fā)育調(diào)控的生物技術(shù)應(yīng)用前景分析[J]. 胡煒,汪亞平,朱作言.  科學(xué)通報(bào). 2005(24)
[9]轉(zhuǎn)基因鯉與普通鯉的肌肉營(yíng)養(yǎng)成分比較[J]. 閆學(xué)春,梁利群,曹頂臣,孫效文.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2005(04)
[10]斑馬魚基因工程的研究進(jìn)展[J]. 吳玉萍,熊茜,張廣獻(xiàn),徐安龍.  遺傳學(xué)報(bào). 2004(10)



本文編號(hào)：3577486