谷氨酰胺是腸道黏膜上皮細胞最主要的供能物質(zhì),谷氨酰胺合成酶GS（glutamine synthetase）與谷氨酰胺合成相關(guān),谷氨酰胺轉(zhuǎn)運載體ASCT2（AlaSerCys Transporter 2）與谷氨酰胺轉(zhuǎn)運相關(guān),研究腸道GS和ASCT2基因功能可深入了解谷氨酰胺的吸收轉(zhuǎn)運、合成及利用的分子生物學(xué)機理。本研究利用T-A和RACE技術(shù)從草魚（Ctenopharyngodon idellus）腸道克隆出GS和ASCT2cDNA全序列,采用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測草魚不同組織、不同發(fā)育時期GS和ASCT2基因的表達,分析不同蛋白及谷氨酰胺二肽日糧對草魚GS和ASCT2基因表達的調(diào)控作用。1、草魚GS、ASCT2 cDNA克隆及系統(tǒng)進化分析草魚GScDNA全長為1457 bp,包括1116 bp的編碼區(qū)、114bp的5’UTR和 227 bp的3’UTR,共編碼371個氨基酸。草魚GScDNA全長為2168bp,包括1626 bp的編碼區(qū)、152bp的5’UTR和390 bp的3’UTR,共編碼541個氨基酸。系統(tǒng)進化分析表明GS及ASCT2在進化上均比較保守,GS與鯉魚（Cypri... 

【文章來源】：湖南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．１總ＲＮＡ電泳??

?ｓｙｍｐｏｒｔｅｒ?ｆａｍｉｌｙ）結(jié)構(gòu)域（在蛋白序列上的位置分別為５３－４８４），該結(jié)構(gòu)域主要與??鈉離子轉(zhuǎn)運，相關(guān)結(jié)果見圖２．３。此外，用ＴＭＨＭＭ２．０在線軟件對草魚ＡＳＣＴ２基??因所編碼的氨基酸殘基的跨膜結(jié)構(gòu)進行分析，結(jié)果顯示草魚ＡＳＣＴ２具有跨膜結(jié)構(gòu)??域，疏水性分析顯示該蛋白可能存在７個跨膜區(qū)域（結(jié)果見圖２．４）。??（２）?ＧＳ、ＡＳＣＴ２同源性分析??首先將ＧＳ與ＡＳＣＴ２在ＧｅｎＢａｎｋ中進行ＢＬＡＳＴ分析，分別獲取了?１４個物種??的ＧＳ基因序列和２０個物種的ＡＳＣＴ２基因（在ＧｅｎＢａｎｋ的登錄號詳見表２．６、??２．７）。使用?Ｍｅｇａ?４．１?構(gòu)建鄰接（Ｎｅｉｇｈｂｏｕｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ，?ＮＪ）進化樹，１０００?次?Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ??重復(fù)檢驗進化樹的置信度（圖２．５、２．６）。??結(jié)果表明，草魚ＧＳ與同屬鯉科魚類的鯉魚同源性最高，達到９８．４％。此外，??魚類ＧＳ具有高度的保守性，序列同源性在達到９５％－９８％之間，而且與哺乳動物??分別獨立形成一枝，與傳統(tǒng)分類學(xué)一致。草魚ＡＳＣＴ２基因編碼５４１個氨基酸的??序列

?ｓｙｍｐｏｒｔｅｒ?ｆａｍｉｌｙ）結(jié)構(gòu)域（在蛋白序列上的位置分別為５３－４８４），該結(jié)構(gòu)域主要與??鈉離子轉(zhuǎn)運，相關(guān)結(jié)果見圖２．３。此外，用ＴＭＨＭＭ２．０在線軟件對草魚ＡＳＣＴ２基??因所編碼的氨基酸殘基的跨膜結(jié)構(gòu)進行分析，結(jié)果顯示草魚ＡＳＣＴ２具有跨膜結(jié)構(gòu)??域，疏水性分析顯示該蛋白可能存在７個跨膜區(qū)域（結(jié)果見圖２．４）。??（２）?ＧＳ、ＡＳＣＴ２同源性分析??首先將ＧＳ與ＡＳＣＴ２在ＧｅｎＢａｎｋ中進行ＢＬＡＳＴ分析，分別獲取了?１４個物種??的ＧＳ基因序列和２０個物種的ＡＳＣＴ２基因（在ＧｅｎＢａｎｋ的登錄號詳見表２．６、??２．７）。使用?Ｍｅｇａ?４．１?構(gòu)建鄰接（Ｎｅｉｇｈｂｏｕｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ，?ＮＪ）進化樹，１０００?次?Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ??重復(fù)檢驗進化樹的置信度（圖２．５、２．６）。??結(jié)果表明，草魚ＧＳ與同屬鯉科魚類的鯉魚同源性最高，達到９８．４％。此外，??魚類ＧＳ具有高度的保守性，序列同源性在達到９５％－９８％之間，而且與哺乳動物??分別獨立形成一枝，與傳統(tǒng)分類學(xué)一致。草魚ＡＳＣＴ２基因編碼５４１個氨基酸的??序列

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]葉元土:養(yǎng)好腸道,養(yǎng)好魚（下）[J]. 吳群鳳.  當(dāng)代水產(chǎn). 2013(04)
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[5]谷氨酰胺和牛磺酸對仔豬腸黏膜形態(tài)的影響[J]. 張建斌,車向榮,陳娟娟.  飼料研究. 2011(08)
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[7]不同溫度下不同蛋白水平對鏡鯉（Cyprinus carpio L.）非特異性免疫的影響[J]. 張桐,徐奇友,許紅,王常安,尹家勝.  東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2010(12)
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[10]丙氨酰-谷氨酰胺對哲羅魚仔魚生長和抗氧化能力的影響[J]. 徐奇友,王常安,許紅,尹家勝,馬建章.  動物營養(yǎng)學(xué)報. 2009(06)

博士論文
[1]L-亮氨酸對新生哺乳仔豬腸道發(fā)育及氨基酸轉(zhuǎn)運影響的研究[D]. 孫玉麗.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]腸上皮細胞谷氨酰胺載體B～0AT1/ASCT2的克隆表達及嚴重創(chuàng)傷后的功能調(diào)控研究[D]. 黃騫.第二軍醫(yī)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]谷氨酰胺二肽對建鯉生長、免疫和抗應(yīng)激的影響[D]. 蘆紅梅.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]谷氨酰胺二肽對鏡鯉生長、腸道發(fā)育及非特異性免疫的影響[D]. 朱青.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[3]谷氨酰胺對梗阻性黃疸大鼠門靜脈阻斷后腸黏膜屏障的影響[D]. 吳鵬.濱州醫(yī)學(xué)院 2010
[4]谷氨酰胺在冷應(yīng)激雛雞肺損傷中保護作用的研究[D]. 賈海燕.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
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本文編號：3572354