主要組織相容性復(fù)合體（Major Histocompatibility Complex，MHC）是存在于所有已知脊椎動(dòng)物體內(nèi)、與免疫功能密切相關(guān)的基因家族，由它編碼的一類細(xì)胞表面轉(zhuǎn)膜蛋白，能結(jié)合并呈遞內(nèi)源抗原和外源抗原給T淋巴細(xì)胞，激發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)。本文以尼羅羅非魚(yú)為研究對(duì)象，采用同源克隆、RACE-PCR、qPCR等技術(shù)，克隆了尼羅羅非魚(yú)MHC α和β2m基因的cDNA，分析了MHC α和β2mcDNA的多態(tài)性，以及MHC α和β2m基因在健康尼羅羅非魚(yú)各組織（腦、鰓、肝臟、腸、胃、腎臟、心臟、脾臟、皮膚和肌肉）中的分布以及感染無(wú)乳鏈球菌后基因在鰓、腎臟、心臟和脾臟中表達(dá)量的變化。結(jié)果如下：一、尼羅羅非魚(yú)MHC α全長(zhǎng)cDNA的克隆、多態(tài)性及組織表達(dá)分析獲得的尼羅羅非魚(yú)MHC α cDNA全長(zhǎng)為1533bp,其開(kāi)放閱讀框（Open Reading Frame, ORF）為1053bp。編碼的蛋白質(zhì)分子包含信號(hào)肽、MHC結(jié)構(gòu)域、IGc1結(jié)構(gòu)域和跨膜區(qū)，并存在豐富的磷酸化位點(diǎn)。對(duì)氨基酸序列進(jìn)行功能結(jié)構(gòu)域分析的結(jié)果顯示，1-18位為信號(hào)肽，209-283位為功能區(qū)（IGc1區(qū)），303-3... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

尼羅羅非魚(yú)鰓組織總RNA，M:DL2000核酸分子量標(biāo)準(zhǔn)；1-3為不同個(gè)體的尼羅羅非M123

基酸序列進(jìn)行功能結(jié)構(gòu)域分析的結(jié)果顯示，1-18 位為信號(hào)肽，209-283 位為功能區(qū)（IGc1 區(qū)），303-325 位為蛋白質(zhì)的跨膜螺旋區(qū)（圖 1-2）。圖.1-2 尼羅羅非魚(yú) MHC α 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)注：紅色區(qū)域表示信號(hào)肽，黑灰色方框表示 MHC-I 結(jié)構(gòu)域，綠色圓形區(qū)域表示 IGc1 結(jié)構(gòu)域，藍(lán)色表示跨膜螺旋區(qū)。Fig. 1-2 Nile tilapia MHC α protein structure prediction.Note: Red area indicates the signal peptide, black and gray box represents MHC-I domains, green circular2000 bp1000 bp18SSS28SM 1 2 3

圖 1-6 目的基因和內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線a:為目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線，b:內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。Fig.1-6The standard curve of target gene and reference gene.a: the standard curve of the target gene, b: the standard curve of the reference gene.2.5 目的基因和內(nèi)參基因的擴(kuò)增曲線采用 qPCR 技術(shù)，分別檢測(cè)目的基因和內(nèi)參基因在不同樣本中的表達(dá)豐度通過(guò) ABI PRISM 7300 熒光定量 PCR 儀（美國(guó) Applied Biosystems）分析得到環(huán)數(shù)與熒光強(qiáng)度的關(guān)系，結(jié)果見(jiàn)圖 1-7。a.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]赤點(diǎn)石斑魚(yú)MHC IA基因的克隆與表達(dá)多態(tài)性分析[J]. 沈銘輝,鄭樂(lè)云,杜佳瑩,王軍.  廈門大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2013(01)
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[9]廣東與海南養(yǎng)殖羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌的分離、鑒定與特性分析[J]. 盧邁新,黎炯,葉星,鄧國(guó)成,江小燕,田園園,賴翠玲.  微生物學(xué)通報(bào). 2010(05)
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碩士論文
[1]赤點(diǎn)石斑魚(yú)MHC基因的克隆與多態(tài)性分析[D]. 杜佳瑩.廈門大學(xué) 2008
[2]大菱鲆受哈維氏弧菌感染后的基因差異表達(dá)研究[D]. 王傳娟.中國(guó)海洋大學(xué) 2007
[3]草魚(yú)β2m基因的分子克隆與MHC class Ⅰ多態(tài)性分析及其重組蛋白的鑒定[D]. 楊天耀.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



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