雜色鮑（Haliotis diversicolor）是一種重要的經(jīng)濟(jì)貝類(lèi),其生活史中存在附著變態(tài)過(guò)程。本研究在實(shí)驗(yàn)室獲得的雜色鮑轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)基礎(chǔ)上,采用SMART-RACE技術(shù)克隆獲得胰島素/胰島素樣生長(zhǎng)因子信號(hào)通路（IIS）中的胰島素誘導(dǎo)蛋白和胰島素降解酶,分別命名為HdINSIG2和HdIDE。結(jié)合qPCR、原核表達(dá)、酶聯(lián)免疫、RNAi和原位雜交技術(shù)研究了IIS信號(hào)通路成員HdINSIG2、HdIDE、HdIGFBP7和HdMIRP對(duì)雜色鮑幼蟲(chóng)細(xì)胞增殖和凋亡的作用。主要結(jié)果如下:1)HdINSIG2 cDNA全長(zhǎng)為1400 bp;其中5’UTR為123 bp,3’UTR為677 bp,ORF為600 bp;編碼199個(gè)氨基酸;含有5個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。qRT-PCR顯示,在胚胎發(fā)育過(guò)程中,HdINSIG2在幼蟲(chóng)發(fā)育的卵裂階段表達(dá)量相對(duì)較高;胚后階段表達(dá)量顯著低于卵裂階段（P<0.05）。2)HdIDE cDNA長(zhǎng)為4244 bp;其中5’UTR為118 bp,3’UTR為1054 bp,ORF為3072bp;編碼1023個(gè)氨基酸;包含一個(gè)典型的蛋白酶M16功能域和兩個(gè)蛋白酶M16C功... 

【文章來(lái)源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

雜色鮑各組織總RNA瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

圖 3-2 HdINSIG2 SMART-RACE 產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電2 Agarose gel electrophoresis of SMART-RACE productsarker；1：HdINSIG2 3’RACE 產(chǎn)物；2：HdINSIG2 5oducts of agarose gel electrophoresis of marker, 3’RACECE 的測(cè)序結(jié)果用 Vector NTI Advance 11 軟件去tX 序列比對(duì)，驗(yàn)證序列的正確性。通過(guò) ORF 基因的 ORF 引物，通過(guò) PCR 反應(yīng)擴(kuò)增其 ORF圖 3-3 所示，其中 HdINSIG2 的 ORF 長(zhǎng)度為 6H3 的 ORF 長(zhǎng)度為 411 bp。

圖 3-2 HdINSIG2 SMART-RACE 產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖.3-2 Agarose gel electrophoresis of SMART-RACE products of：Marker；1：HdINSIG2 3’RACE 產(chǎn)物；2：HdINSIG2 5’RA products of agarose gel electrophoresis of marker, 3’RACE anRACE 的測(cè)序結(jié)果用 Vector NTI Advance 11 軟件去除lastX 序列比對(duì)，驗(yàn)證序列的正確性。通過(guò) ORF Fin計(jì)基因的 ORF 引物，通過(guò) PCR 反應(yīng)擴(kuò)增其 ORF 序如圖 3-3 所示，其中 HdINSIG2 的 ORF 長(zhǎng)度為 600HdH3 的 ORF 長(zhǎng)度為 411 bp。

【參考文獻(xiàn)】：
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