我國是水產(chǎn)養(yǎng)殖大國，近年來隨育種技術(shù)的發(fā)展已培育出大量水產(chǎn)優(yōu)良品種。而建立水產(chǎn)生物完整遺傳信息長期穩(wěn)定的保存方法，對于有利地保護(hù)瀕危生物資源，實現(xiàn)優(yōu)良品種和品系優(yōu)質(zhì)遺傳資源的穩(wěn)定保存和利用具有十分重要的意義。干細(xì)胞具有無限的自我更新及分化成為胚胎的三個胚層的能力，是解決種質(zhì)資源保護(hù)的良好介質(zhì)，而目前也已有多個魚類胚胎干細(xì)胞系成功建立的報道。關(guān)于維持干細(xì)胞自我更新和多潛能性的分子機(jī)制，在哺乳動物中已經(jīng)開展了大量的研究工作，主要集中于Oct4、Nanog和Sox2等轉(zhuǎn)錄因子形成的核心調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，而在重要海水養(yǎng)殖物種牙鲆中，相關(guān)研究的技術(shù)手段和分子機(jī)理還未見報道。本論文克隆得到了這三個重要轉(zhuǎn)錄因子，并對其基因結(jié)構(gòu)、調(diào)控序列及表達(dá)模式等方面進(jìn)行了初步的分析，為下一步的深入研究奠定基礎(chǔ)。牙鲆Oct4基因全長3978bp，由5個外顯子和4個內(nèi)含子組成，其cDNA序列全長2654/3098bp，包括1428bp的開放閱讀框（ORF），352bp的5′UTR和長度分別為874bp和1318bp的3′UTR。預(yù)計編碼475個氨基酸殘基的蛋白并含有特征性的POU結(jié)構(gòu)域，由POU特異結(jié)構(gòu)域、POU同源結(jié)構(gòu)域以... 

【文章來源】：中國海洋大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：151 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    第一節(jié) 干細(xì)胞及其研究進(jìn)展
        1.1.1 干細(xì)胞的分化潛能
        1.1.2 干細(xì)胞的分類及特征
        1.1.3 干細(xì)胞的研究進(jìn)展
    第二節(jié) 維持干細(xì)胞多能性重要轉(zhuǎn)錄因子
        1.2.1 干細(xì)胞多能性核心調(diào)控網(wǎng)絡(luò)
        1.2.2 轉(zhuǎn)錄因子 Oct4
        1.2.3 轉(zhuǎn)錄因子 Nanog
        1.2.4 轉(zhuǎn)錄因子 Sox2
    第三節(jié) 本研究的目的意義與實驗設(shè)計
第二章 牙鲆（Paralichthysolivaceus）多能性轉(zhuǎn)錄因子 Oct4 的克隆與分析
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 牙鲆基因組 DNA 及總 RNA 的提取
        2.2.3 牙鲆 cDNA 第一鏈的合成
        2.2.4 牙鲆 Oct4 cDNA 及 DNA 全長的獲得
        2.2.5 牙鲆 Oct4 啟動子區(qū)序列的獲得及分析
        2.2.6 牙鲆 Oct4 啟動子區(qū) CpG 位點甲基化分析
        2.2.7 牙鲆 Oct4 時空表達(dá)的 RT-PCR 分析
        2.2.8 牙鲆 Oct4 時空表達(dá)的原位雜交分析
        2.2.9 牙鲆 Oct4 重組蛋白的體外表達(dá)與純化
        2.2.10 牙鲆 Oct4 在性腺組織中的細(xì)胞定位情況分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 牙鲆 Oct4 cDNA 及 DNA 全長序列特征
        2.3.2 牙鲆 Oct4 氨基酸序列同源性及系統(tǒng)進(jìn)化分析
        2.3.3 牙鲆 Oct4 蛋白質(zhì) POU 結(jié)構(gòu)域三維結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.3.4 牙鲆 Oct4 基因結(jié)構(gòu)及染色體同線性分析
        2.3.5 牙鲆 Oct4 基因啟動子序列克隆及調(diào)控序列的生物信息學(xué)分析
        2.3.6 牙鲆 Oct4 基因啟動子區(qū) CpG 位點甲基化情況分析
        2.3.7 牙鲆 Oct4 基因時空表達(dá)的 RT-PCR 分析
        2.3.8 牙鲆 Oct4 基因時空表達(dá)的原位雜交分析
        2.3.9 牙鲆 Oct4 重組蛋白的原核表達(dá)與純化
        2.3.10 牙鲆 Oct4 重組蛋白在性腺中的細(xì)胞定位
    2.4 討論
第三章 牙鲆（Paralichthys olivaceus）多能性轉(zhuǎn)錄因子 Nanog 的克隆與分析
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 牙鲆 Nanog cDNA 及 DNA 全長的獲得
        3.2.3 牙鲆 Nanog 啟動子區(qū)序列的獲得及分析
        3.2.4 牙鲆 Nanog 啟動子區(qū) CpG 位點甲基化分析
        3.2.5 牙鲆 Nanog 時空表達(dá)的 RT-PCR 分析
        3.2.6 牙鲆 Nanog 時空表達(dá)的原位雜交分析
        3.2.7 牙鲆 Nanog 融合蛋白的體外表達(dá)與純化
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 牙鲆 Nanog cDNA 及 DNA 全長序列特征
        3.3.2 牙鲆 Nanog 氨基酸序列同源性及系統(tǒng)進(jìn)化分析
        3.3.3 牙鲆 Nanog 蛋白質(zhì) HD 結(jié)構(gòu)域三維結(jié)構(gòu)預(yù)測
        3.3.4 牙鲆 Nanog 基因結(jié)構(gòu)及染色體同線性分析
        3.3.5 牙鲆 Nanog 基因啟動子序列的克隆及生物信息學(xué)分析
        3.3.6 牙鲆 Nanog 基因啟動子區(qū) CpG 位點甲基化情況分析
        3.3.7 牙鲆 Nanog 基因時空表達(dá)的 RT-PCR 分析
        3.3.8 牙鲆 Nanog 基因時空表達(dá)的原位雜交分析
        3.3.9 牙鲆 Nanog 重組蛋白的原核表達(dá)與純化
    3.4 討論
第四章 牙鲆（Paralichthysolivaceus）多能性轉(zhuǎn)錄因子 Sox2 的克隆與分析
    4.1 引言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 牙鲆 Sox2 cDNA 全長的獲得
        4.2.3 牙鲆 Sox2 啟動子區(qū)序列的獲得及分析
        4.2.4 牙鲆 Sox2 啟動子區(qū) CpG 位點甲基化分析
        4.2.5 牙鲆 Sox2 時空表達(dá)的 RT-PCR 分析
        4.2.6 牙鲆 Sox2 時空表達(dá)的原位雜交分析
        4.2.7 牙鲆 Sox2 融合蛋白的體外表達(dá)與純化
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 牙鲆 Sox2 cDNA 全長序列特征
        4.3.2 牙鲆 Sox2 氨基酸序列同源性及系統(tǒng)進(jìn)化分析
        4.3.3 牙鲆 Sox2 蛋白質(zhì) HMG 結(jié)構(gòu)域三維結(jié)構(gòu)預(yù)測
        4.3.4 牙鲆 Sox2 基因啟動子序列克隆及調(diào)控序列的生物信息學(xué)分析
        4.3.5 牙鲆 Sox2 基因啟動子區(qū) CpG 位點甲基化情況分析
        4.3.6 牙鲆 Sox2 基因時空表達(dá)的 RT-PCR 分析
        4.3.7 牙鲆 Sox2 基因時空表達(dá)的原位雜交分析
        4.3.8 牙鲆 Sox2 重組蛋白的原核表達(dá)
    4.4 討論
附錄
參考文獻(xiàn)
個人簡歷
發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3562302