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青魚MAVS的克隆及功能初探

發(fā)布時(shí)間:2022-01-01 01:02
  MAVS(線粒體抗病毒信號(hào)蛋白)在宿主細(xì)胞抵御微生物病原體的固有免疫應(yīng)答中扮演著一個(gè)重要的角色。在這篇研究中,我們克隆了青魚MAVS的cDNA全長序列,并對(duì)MAVS的功能進(jìn)行了初步研究。青魚MAVS全長cDNA由2352個(gè)核苷酸組成,由軟件預(yù)測的MAVS蛋白包含有579個(gè)氨基酸,分子量為62.4kDa,等電點(diǎn)4.83。結(jié)構(gòu)分析顯示青魚MAVS的功能性結(jié)構(gòu)域包括N端CARD結(jié)構(gòu)域(半胱氨酸蛋白酶激活和募集結(jié)構(gòu)域),中間富脯氨酸結(jié)構(gòu)域,假定的TRAF2結(jié)合位點(diǎn)和C端跨膜結(jié)構(gòu)域,這與哺乳動(dòng)物的MAVS相類似。序列比對(duì)顯示青魚MAVS與其它已知的魚類和哺乳動(dòng)物的MAVS的CARD結(jié)構(gòu)域有著很高的相似性(53.3%-97.6%),這也暗示了魚類和哺乳動(dòng)物的MAVS的CARD結(jié)構(gòu)域具有保守性。青魚MAVS在所有選定的組織中都有穩(wěn)定表達(dá),包括鰓、腎臟、心臟、腸、肝臟、肌肉、皮膚和脾臟;在GCRV和SVCV病毒感染后,腸、肝臟和肌肉組織中的青魚MAVS mRNA水平明顯提高,但是在感染GCRV和SVCV病毒的青魚脾臟中的MAVS轉(zhuǎn)錄水平卻下降了。在免疫印跡分析中,我們檢測出青魚MAVS蛋白在HEK29... 

【文章來源】:湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】:57 頁

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

青魚MAVS的克隆及功能初探


5’FullRaceKit原理圖

原理圖,原理圖,青魚,步驟


圖 2-2:3’RACE 原理圖步驟具體如下:魚脾臟總 RNA 提取。參照步驟(2.1.4.1)據(jù)2.3.1得到的青魚mavs基因中間段序列設(shè)計(jì)克隆3’UTR內(nèi)

青魚,全長cDNA,結(jié)構(gòu)域


26圖 3-1:青魚 MAVS 的全長 cDNA。青魚 MAVS 全長 cDNA 由 2352 個(gè)核苷酸組成,預(yù)測的青魚 MAVS 蛋白包含 579 個(gè)氨基酸。畫框的是 CARD 結(jié)構(gòu)域(10-93aa),劃線的是富脯氨酸結(jié)構(gòu)域(106-209aa);TRAF2 結(jié)合位點(diǎn)(322-325aa)是用雙線標(biāo)記的區(qū)域而劃紅線的區(qū)域是TM 結(jié)構(gòu)域(558-575aa)。蛋白結(jié)構(gòu)域的預(yù)測是通過在線軟件 Simple Modular ArchitectureResearch Tool (SMART) (http://smart.embl-heidelberg.de/) , Pfam database search(http://pfam.sanger.ac.uk/search)和 NCBI 的 CDD(Conserved Domain Database)數(shù)據(jù)庫,而域內(nèi)特性是通過 PROSITE 數(shù)據(jù)庫 (http://us.expasy.org/tools/scanprosite)預(yù)測出來的。3.2 青魚 MAVS 的進(jìn)化研究為了分析 MAVS 的進(jìn)化,我們將青魚 MAVS 全長序列以及它的功能結(jié)構(gòu)域—CARD 結(jié)構(gòu)域,跨膜結(jié)構(gòu)域(TM)和富脯氨酸結(jié)構(gòu)域與其它物種的 MAVS 進(jìn)


本文編號(hào):3561342

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