本實驗從中華鱉（Trionyx sinensis）腸道內(nèi)分離出了對中華鱉常見致病菌具有較強拮抗作用的潛在益生菌,對篩選出來的益生菌的特性進行檢測和研究,并進一步研究了在飼料中添加該益生菌對中華鱉生長、免疫的影響,為中華鱉養(yǎng)殖行業(yè)中益生菌的應(yīng)用提供基礎(chǔ)。本研究的主要結(jié)果如下：（1）通過點種法初篩和牛津杯法復(fù)篩,從中華鱉腸道篩選到1株對嗜水氣單胞菌（A eromonas hydrophila）、溫和氣單胞菌（A. sobria）以及豚鼠氣單胞菌（A.caviae）具有拮抗作用的菌株Dec-43。對該菌株進行形態(tài)及生理生化特征分析,結(jié)果與屎腸球菌的生理生化特征一致；提取細菌基因組DNA,通過16S rRNA基因通用引物進行PCR擴增,該菌株的16S rRNA基因克隆到了一個長度為1448pb的片段,經(jīng)測序和序列比對,該片段與Genbank中屎腸球菌的序列相似性達99%,因此,該菌株確定為屎腸球菌（Enterococcus faecium）。通過單因素試驗確定了該菌株的最佳生長溫度、鹽度、初始pH、接種量分別為36℃,鹽度0.6%,培養(yǎng)基初始pH值7,接種量10%；通過正交試驗,確定了培養(yǎng)基中... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1 益生菌簡介
    2 常用益生菌種類
    3 益生菌的篩選
    4 益生菌的主要作用機理
        4.1 營養(yǎng)作用
        4.2 拮抗作用
        4.3 水質(zhì)調(diào)節(jié)作用
        4.4 益生菌對宿主免疫作用的影響
    5 益生屎腸球菌
        5.1 屎腸球菌腸道菌素的功能特性
        5.2 對宿主腸道菌群的調(diào)節(jié)作用
        5.3 對病原微生物的抑制作用
        5.4 對宿主生長性能的影響
        5.5 對宿主免疫功能的影響
        5.6 其他益生作用
    6 本研究的目的和意義
第二章 中華鱉腸道益生菌的篩選、鑒定及生長特性研究
    1 材料與方法
        1.1 實驗材料
            1.1.1 實驗動物
            1.1.2 實驗菌株
            1.1.3 培養(yǎng)基
            1.1.4 實驗試劑
        1.2 實驗方法
            1.2.1 中華鱉腸道細菌的分離
            1.2.2 益生菌的初篩
            1.2.3 益生菌的復(fù)篩
            1.2.4 益生菌的酸耐受實驗
            1.2.5 益生菌的生理生化鑒定以及16S rRNA基因序列分析
            1.2.6 益生菌培養(yǎng)條件的優(yōu)化
    2 結(jié)果與分析
        2.1 益生菌的初篩結(jié)果
        2.2 益生菌的復(fù)篩結(jié)果
        2.3 益生菌的酸耐受實驗
        2.4 菌株生理生化結(jié)果分析以及16S rRNA基因序列分析結(jié)果
        2.5 Dec-43的生長曲線
        2.6 不同溫度對Dec-43生長的影響
        2.7 不同鹽度對Dec-43生長的影響
        2.8 不同初始pH對Dec-43生長的影響
        2.9 不同接種量對Dec-43生長的影響
        2.10 不同碳氮比對Dec-43生長的影響
    3 討論
第三章 益生菌對中華鱉生長、免疫的影響
    1 材料方法
        1.1 細菌培養(yǎng)
        1.2 實驗飼料
        1.3 實驗分組和動物飼養(yǎng)
        1.4 生長性能評估
        1.5 免疫指標測定
            1.5.1 中華鱉血液收集
            1.5.2 制備吞噬原
            1.5.3 血液白細胞吞噬活性的測定
            1.5.4 溶菌酶活性的測定
            1.5.5 髓過氧化物酶(MPO)活性和血清補體(C3、C4)含量的測定
        1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 投喂菌株Dec-43對中華鱉生長性能的影響
        2.2 菌株Dec-43對中華鱉非特異性免疫功能的影響
            2.2.1 菌株Dec-43對中華鱉血液白細胞吞噬活性的影響
            2.2.2 菌株Dec-43對中華鱉血清溶菌酶活性的影響
            2.2.3 菌株Dec-43對中華鱉血清髓過氧化物酶(MPO)活性的影響
            2.2.4 菌株Dec-43對中華鱉血清補體(C3、C4)含量的影響
    3 討論
第四章 益生菌對中華鱉感染嗜水氣單胞菌后免疫相關(guān)基因表達的調(diào)節(jié)
    1 材料方法
        1.1 細菌培養(yǎng)
        1.2 實驗飼料
        1.3 實驗分組和動物飼養(yǎng)
        1.4 嗜水氣單胞菌攻毒
        1.5 樣品收集
        1.6 組織總RNA的提取
            1.6.1 組織勻漿
            1.6.2 分離
            1.6.3 RNA沉淀
            1.6.4 RNA洗滌
            1.6.5 RNA溶解
            1.6.6 RNA的檢測
        1.7 組織cDNA的制備
            1.7.1 去除基因組DNA反應(yīng)
            1.7.2 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
            1.7.3 cDNA模板質(zhì)量檢測
        1.8 Real-Time PCR
        1.9 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果
        2.1 RNA質(zhì)量的檢測
        2.2 反轉(zhuǎn)錄效果的檢測
        2.3 感染嗜水氣單胞菌后肝臟中免疫相關(guān)基因的表達量的變化
        2.4 感染嗜水氣單胞菌后脾臟中免疫相關(guān)基因的表達量的變化
        2.5 感染嗜水氣單胞菌后腎臟中免疫相關(guān)基因的表達量的變化
        2.6 感染嗜水氣單胞菌后腸道中免疫相關(guān)基因的表達量的變化
    3 討論
參考文獻
附錄
致謝


【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：3555185