發(fā)布時間：2021-12-24 03:32

　　[目的]本文旨在獲得可溶的鯉魚（Cyprinus carpio）groupⅢ分泌型磷脂酶A₂（PLA2g3a1）催化活性區(qū)（PLA₂ bee venom like region,PBVR）原核重組蛋白,并測定該蛋白的磷脂酶活性。[方法]分別構(gòu)建標簽蛋白小分子泛素樣修飾蛋白（small ubiquitin-like modifier,SUMO）、硫氧還原蛋白（thioredoxin A,TrxA）、N利用物質(zhì)A（N-utilization substance A,NusA）、麥芽糖結(jié)合蛋白（maltose-binding protein,MBP）與PBVR的重組表達質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌感受態(tài)細胞Transetta（DE3）進行原核表達,比較不同標簽蛋白的促溶作用;使用Ni-NTA柱純化重組蛋白,與BSA蛋白標準品電泳比對確定純化后蛋白的濃度;采用偶聯(lián)氧脂合酶法測定PBVR重組蛋白的磷脂酶活性。[結(jié)果]促溶作用最高的標簽蛋白是NusA,可溶性重組蛋白占總蛋白的95%,其次是MBP和TrxA,分別占87%和47%。綜合考量可溶性重組蛋白的得率,選擇... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學學報. 2020,43(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

純化后蛋白質(zhì)量的測定

融合蛋白的磷脂酶A2(PLA2)活性

分別在22、25、28和30 ℃條件下,測定MBP-PBVR的PLA2比活力。結(jié)果表明(圖5):這幾個溫度下酶活性無顯著性差異(P>0.05),25 ℃時酶活性最高。在25 ℃時,分別測定不同pH值(6.0、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0和10.0)對PLA2酶活性的影響,發(fā)現(xiàn)pH 7.5時酶活性最高。2.3.2 Ca2+對MBP-PBVR的PLA2酶活性的影響

【參考文獻】：
期刊論文
[1]鯉sPLA2-Ⅲ基因結(jié)構(gòu)、系統(tǒng)發(fā)育和表達特征[J]. 許迪輝,李紅霞,李建林,唐永凱,王欽,張磊,沈澤恩,俞菊華.  水生生物學報. 2019(06)
[2]不同標簽輔助的IBTX原核表達純化及活性鑒定[J]. 趙志文,張崢,劉浩文,黃智剛,吳穎.  現(xiàn)代生物醫(yī)學進展. 2014(07)
[3]應用響應曲面法研究金華火腿生產(chǎn)過程中磷脂酶的變化[J]. 郇延軍,周光宏,徐幸蓮.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2005(02)



本文編號：3549741