日本鰻鱺GILT及COX-2基因的克隆與表達(dá)
發(fā)布時(shí)間:2021-12-17 18:21
日本鰻鱺是世界主要水產(chǎn)養(yǎng)殖種類之一,是中國重要的經(jīng)濟(jì)魚類,但我們對(duì)其免疫反應(yīng)機(jī)理的研究較為匱乏。γ-干擾素誘導(dǎo)的溶酶體巰基還原酶(gamma-interferon-inducible lysosomal thiol reductase,GILT)可通過二硫鍵的還原在II型組織相容性復(fù)合物抗原呈遞過程中起到對(duì)外來抗原進(jìn)行去折疊及隨后的蛋白酶水解的作用;環(huán)氧化酶(cyclooxygenase,COX)可通過連續(xù)的氧化和還原反應(yīng)將花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素內(nèi)過氧化物H2,進(jìn)而在脊椎動(dòng)物中參與廣泛的生理過程,包括發(fā)熱、炎癥反應(yīng)、維持妊娠和調(diào)節(jié)離子運(yùn)輸?shù)。本文從日本鰻鱺(Anguilla japonica)中克隆了兩種與免疫相關(guān)的基因,GILT與COX-2。本研究主要檢測(cè)了GILT和COX-2在日本鰻鱺黑仔鰻多個(gè)組織及玻璃鰻中的表達(dá)情況,受外源物細(xì)菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)、多聚胞苷酸(polyinosinic-polycytidylic acid,Poly I:C)和鰻鱺致病菌Edwardsiella tarda的刺激下,3個(gè)基因在多個(gè)組織器官中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)量的變化,...
【文章來源】:集美大學(xué)福建省
【文章頁數(shù)】:77 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
GILT還原機(jī)理[8]
集美大學(xué)碩士學(xué)位論文 日本鰻鱺GILT及COX-2基因的克隆與表達(dá)活性。在李斯特菌感染過程中,為避免被消滅會(huì)釋放 LLO,而只有還原態(tài)的 LLO 具有活性,GILT 則充當(dāng)該過程的還原劑。GILT 可維持一個(gè)正常的細(xì)胞內(nèi)的氧化谷胱甘肽比的降低,防止異常的線粒體自噬;GILT 還可調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的氧化還原態(tài),增強(qiáng)某些細(xì)胞超氧化物歧化酶 2(Superoxide dismutase,SOD2) 的表達(dá)以及穩(wěn)定;此外,在細(xì)胞外 GILT 可由激活的巨噬細(xì)胞分泌,表明其在炎癥中具有未知的作用 (見圖 1.2)。還有研究證明 GILT 參與中和細(xì)胞外的病原體和清除感染的細(xì)胞碎片等過程[20];GILT 的缺失會(huì)影響對(duì)細(xì)菌、寄生蟲、病毒等的免疫應(yīng)答,并且導(dǎo)致自身免疫性疾病[9];成纖維細(xì)胞中表達(dá)的 GILT 可以降低活性氧的濃度,比如超氧負(fù)離子,從而減弱了細(xì)胞增殖[11]。研究還發(fā)現(xiàn)在 IFN-γ,PMA (phorbol-12-myristate-13-acetate) 和 LPS 的誘導(dǎo)作用下可使 THP-1 細(xì)胞分泌促炎細(xì)胞因子和趨化因子,包括 GILT[20]。該基因可能在免疫應(yīng)答反應(yīng)中有重要作用。
5圖 1.3 前列腺素類生物合成途徑[30]Fig.1.3 Prostanoid biosynthetic pathway[30]1.2.2 硬骨魚類COX-2 的研究現(xiàn)狀在硬骨魚類中,COX同源物已從虹鱒 (Oncorhynchus mykiss)[28]、金魚 (Carassiusauratus)[31]、斑馬魚 (Danio rerio)[21]、青鳉 (Oryzias latipes)[32]、美洲紅點(diǎn)鮭 (Salvelinusfontinalis)[33]、塞內(nèi)加爾鰨 (Solea senegalensis)[14]、波紋絨須石首魚 (Micropogonias undulatus)[35]及狼鱸(Dicentrarchus labrax L)[36]等中得到克隆鑒定。在硬骨魚類中,COX-2參與多種生物過程。LPS、重組IL-1β和鰻弧菌 (Vibrio anguillarum) 可誘導(dǎo)狼鱸的頭腎白細(xì)胞中COX-2基因上調(diào)轉(zhuǎn)錄表達(dá)[36];LPS、IL-1β和天蠶抗菌肽B可以誘導(dǎo)虹鱒COX-2a在虹鱒魚性腺細(xì)胞RTG-2中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)[28],表明COX-2可以參與炎癥反應(yīng)。此外,在佛波酯PMA(phorbol-12-myristate-13-acetate)/ A23187作用下,美洲紅點(diǎn)鮭COX-2在皮膚中轉(zhuǎn)錄表達(dá)量顯著上調(diào)[33]。另有研究發(fā)現(xiàn)PMA/A23187誘導(dǎo)魚類合成前列腺素PGF及PGE,后者參與排卵的生理過程[34],因而認(rèn)為
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]牙鲆鰓淋巴樣組織內(nèi)免疫相關(guān)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)[J]. 劉云,姜國良,姜明,張士璀. 青島海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2001(06)
碩士論文
[1]虹鱒魚γ-IFN誘導(dǎo)的溶酶體巰基還原酶及LIGHT(TNFSF14)的克隆、表達(dá)及生物學(xué)活性研究[D]. 劉萌.南京師范大學(xué) 2013
[2]非洲爪蟾白細(xì)胞介素8及γ-IFN誘導(dǎo)的溶酶體巰基還原酶的克隆、表達(dá)及生物學(xué)活性研究[D]. 崔縣偉.南京師范大學(xué) 2012
本文編號(hào):3540680
【文章來源】:集美大學(xué)福建省
【文章頁數(shù)】:77 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
GILT還原機(jī)理[8]
集美大學(xué)碩士學(xué)位論文 日本鰻鱺GILT及COX-2基因的克隆與表達(dá)活性。在李斯特菌感染過程中,為避免被消滅會(huì)釋放 LLO,而只有還原態(tài)的 LLO 具有活性,GILT 則充當(dāng)該過程的還原劑。GILT 可維持一個(gè)正常的細(xì)胞內(nèi)的氧化谷胱甘肽比的降低,防止異常的線粒體自噬;GILT 還可調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的氧化還原態(tài),增強(qiáng)某些細(xì)胞超氧化物歧化酶 2(Superoxide dismutase,SOD2) 的表達(dá)以及穩(wěn)定;此外,在細(xì)胞外 GILT 可由激活的巨噬細(xì)胞分泌,表明其在炎癥中具有未知的作用 (見圖 1.2)。還有研究證明 GILT 參與中和細(xì)胞外的病原體和清除感染的細(xì)胞碎片等過程[20];GILT 的缺失會(huì)影響對(duì)細(xì)菌、寄生蟲、病毒等的免疫應(yīng)答,并且導(dǎo)致自身免疫性疾病[9];成纖維細(xì)胞中表達(dá)的 GILT 可以降低活性氧的濃度,比如超氧負(fù)離子,從而減弱了細(xì)胞增殖[11]。研究還發(fā)現(xiàn)在 IFN-γ,PMA (phorbol-12-myristate-13-acetate) 和 LPS 的誘導(dǎo)作用下可使 THP-1 細(xì)胞分泌促炎細(xì)胞因子和趨化因子,包括 GILT[20]。該基因可能在免疫應(yīng)答反應(yīng)中有重要作用。
5圖 1.3 前列腺素類生物合成途徑[30]Fig.1.3 Prostanoid biosynthetic pathway[30]1.2.2 硬骨魚類COX-2 的研究現(xiàn)狀在硬骨魚類中,COX同源物已從虹鱒 (Oncorhynchus mykiss)[28]、金魚 (Carassiusauratus)[31]、斑馬魚 (Danio rerio)[21]、青鳉 (Oryzias latipes)[32]、美洲紅點(diǎn)鮭 (Salvelinusfontinalis)[33]、塞內(nèi)加爾鰨 (Solea senegalensis)[14]、波紋絨須石首魚 (Micropogonias undulatus)[35]及狼鱸(Dicentrarchus labrax L)[36]等中得到克隆鑒定。在硬骨魚類中,COX-2參與多種生物過程。LPS、重組IL-1β和鰻弧菌 (Vibrio anguillarum) 可誘導(dǎo)狼鱸的頭腎白細(xì)胞中COX-2基因上調(diào)轉(zhuǎn)錄表達(dá)[36];LPS、IL-1β和天蠶抗菌肽B可以誘導(dǎo)虹鱒COX-2a在虹鱒魚性腺細(xì)胞RTG-2中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)[28],表明COX-2可以參與炎癥反應(yīng)。此外,在佛波酯PMA(phorbol-12-myristate-13-acetate)/ A23187作用下,美洲紅點(diǎn)鮭COX-2在皮膚中轉(zhuǎn)錄表達(dá)量顯著上調(diào)[33]。另有研究發(fā)現(xiàn)PMA/A23187誘導(dǎo)魚類合成前列腺素PGF及PGE,后者參與排卵的生理過程[34],因而認(rèn)為
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]牙鲆鰓淋巴樣組織內(nèi)免疫相關(guān)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)[J]. 劉云,姜國良,姜明,張士璀. 青島海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2001(06)
碩士論文
[1]虹鱒魚γ-IFN誘導(dǎo)的溶酶體巰基還原酶及LIGHT(TNFSF14)的克隆、表達(dá)及生物學(xué)活性研究[D]. 劉萌.南京師范大學(xué) 2013
[2]非洲爪蟾白細(xì)胞介素8及γ-IFN誘導(dǎo)的溶酶體巰基還原酶的克隆、表達(dá)及生物學(xué)活性研究[D]. 崔縣偉.南京師范大學(xué) 2012
本文編號(hào):3540680
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