CD82是Ⅲ型四次跨膜蛋白超家族的成員之一,在人體的許多組織中廣泛表達,參與多種生理過程,如細胞遷移、黏附和信號傳導(dǎo),最初被鑒定為T細胞激活的輔助分子,在高等脊椎動物T細胞和抗原呈遞細胞中能夠參與免疫突觸的形成。在本實驗室已獲得日本七鰓鰻CD82基因序列的基礎(chǔ)上,本文首先利用生物信息學(xué)方法將CD82分子和CD37分子進行了進化比較分析,由此鑒定已獲得的七鰓鰻CD82的確屬于脊椎動物CD82分子。pCold TF載體是一種插入蛋白可溶性標簽的融合性冷休克原核表達載體,利用Overlap PCR方法設(shè)計引物將載體進行改造,命名為GpCold TF。構(gòu)建GpCold TFCD82表達載體,使難以在原核宿主中表達的四次跨膜蛋白得到了可溶性表達。經(jīng)組氨酸親和層析柱純化和Factor Xa蛋白酶切,最終獲得去除助溶蛋白TF標簽的七鰓鰻CD82重組蛋白純品。通過OptimumAntigenTM抗原設(shè)計軟件,利用多肽合成技術(shù),合成七鰓鰻CD82特異性的抗原表位多肽,以此抗原表位免疫刺激新西蘭兔制備兔源七鰓鰻CD82多克隆抗體。通過Western Blot方法,以β-actin為內(nèi)參,檢測CD82天然蛋... 

【文章來源】：遼寧師范大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

人CD82分子結(jié)構(gòu)模型

運用 BioEdit7.0軟件將七鰓鰻 CD82 序列及不同物種的 CD82 和 CD37 序列進行多重序列比對分析（圖2.1）。結(jié)果顯示，七鰓鰻 CD82 序列與人、小鼠、地山雀、揚子鱷、非洲爪蟾及葉吻銀鮫的 CD82 和 CD37 序列分別具有 36~39%和 28%~ 34%的同源性。CD82 及 CD37 作為四次跨膜蛋白，均具有典型的四個跨膜結(jié)構(gòu)域，即 TM1、TM2、TM3 和 TM4。多重序列比對結(jié)果顯示，七鰓鰻 CD82 的 TM1、TM2、TM3 和 TM4 結(jié)構(gòu)域與人 CD82 的 TM1(Leu13-Leu35)、TM2 (Gly55-Ala77)、TM3 (Leu84-Phe106) 和 TM4 (Ile230-Leu252)結(jié)構(gòu)域同源性分別為 63%、48%、41%和 43%，而與人 CD37 的 TM1-TM4 同源性分別為 32%、23%、25%和 18%。在 EC2 結(jié)構(gòu)域上，由 6 個半胱氨酸殘基構(gòu)成的 Cys-Cys-Gly…Cys-Ser-Cys…Cys…Cys 基序在所有物種中高度保守，此基序是脊椎動物四跨膜蛋白 CD82 和 CD37 共同的典型特征。以上結(jié)果表明，七鰓鰻 CD82 序列與各物種 CD82 序列同源性較各物種CD37 序列同源性更高。

- 13 -圖 2.3 各物種 CD82 和 CD37 的系統(tǒng)發(fā)育樹（鄰接法）Fig.2.3 Phylogenetic tree of Lja-CD82 with some CD82 and CD37 homologs from jawlessand jawed vertebrates based on NJ method.

【參考文獻】：
期刊論文
[1]人膜蛋白CD81的原核表達與純化[J]. 朱海珍,雷少華,劉春艷,焦宇,于曉妍,高益敏.  湖南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2012(08)



本文編號：3528860