伊麗莎白菌是一類具有多重耐藥性的條件致病菌,可感染新生兒和免疫缺陷人群,被感染患者具有較高的死亡率,近年來被報道可感染蛙類,能導(dǎo)致蛙類發(fā)生暴發(fā)性歪頭癥。該病傳染性強,死亡率高,治愈率低,是危害我國養(yǎng)殖蛙類的最主要病害之一。早期人們對伊麗莎白菌的認(rèn)識較少,其屬內(nèi)物種的鑒定和分類系統(tǒng)比較混亂,基礎(chǔ)研究工作相對滯后,尤其在我國養(yǎng)殖蛙類中的流行特點及耐藥機制研究十分匱乏。本研究在對蛙源伊麗莎白菌準(zhǔn)確鑒定的基礎(chǔ)上,通過全基因組測序、比較基因組學(xué)和分子分型,研究病原米爾伊麗莎白菌種內(nèi)和屬內(nèi)物種的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系,比較流行菌株的克隆關(guān)系;基于全基因組數(shù)據(jù),研究伊麗莎白菌碳青霉烯類耐藥機制,揭示其碳青霉烯酶變異體多樣性,主要研究內(nèi)容和結(jié)論如下:一,首次確定米爾伊麗莎白菌為黑斑蛙歪頭病的病原。對采自多個養(yǎng)殖區(qū)的患歪頭病的黑斑蛙進(jìn)行了系統(tǒng)的病原學(xué)診斷,排除了蛙病毒、壺菌和寄生蟲感染的可能性,發(fā)現(xiàn)細(xì)菌感染的陽性率為190/213,基于16S r DNA和gyr B基因序列,將優(yōu)勢分離株鑒定為米爾伊麗莎白菌;對自然發(fā)病蛙腦組織的病理觀察和超微結(jié)構(gòu)分析顯示,被感染蛙的腦膜增厚,出現(xiàn)炎性病變,神經(jīng)元細(xì)胞受損;人工感染... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：161 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

伊麗莎白菌分類學(xué)變化

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆博士研究生學(xué)位論文24從其核心基因組中注釋到了67個假定毒力基因，同時他們還發(fā)現(xiàn)多個暴發(fā)菌株的淀粉利用酶SusD發(fā)生了改變，與莢膜多糖合成相關(guān)的多糖轉(zhuǎn)運蛋白Wza或Wzc被部分或完全破壞，由此推測，暴發(fā)菌株莢膜多糖的缺失可能會促進(jìn)其粘附和定植，導(dǎo)致其抗原性的降低，通過改變菌體表面粘附力而使其更容易在宿主體內(nèi)擴散。此外，他們還對114個伊麗莎白菌基因組中的cps基因簇（莢膜多糖合成酶基因簇，capsularpolysaccharidesynthesiscluster）進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)該屬內(nèi)物種的cps基因簇有17個不同的基因組合模式，而本次疾病暴發(fā)中的分離株cps基因簇卻非常一致，同屬于一個類型（typeI），因此推測該類型的cps基因簇在這些分離株的致病力中發(fā)揮了一定的作用。除了基于基因組的致病基因研究外，Huang等（2019）等建立了E.miricola感染黑斑蛙的模型，用來研究伊麗莎白菌對機體的損傷機制（圖1.2）。研究發(fā)現(xiàn)，病原菌主要定植在宿主的大腦，導(dǎo)致神經(jīng)源性器官損傷，伊麗莎白菌在感染黑斑蛙時，可導(dǎo)致黑斑蛙的氧化應(yīng)激反應(yīng)（oxidativestress），從而引起線粒體應(yīng)激（mitochondrialstress）和未折疊蛋白反應(yīng)（unfoldedproteinresponse），用來消除細(xì)胞內(nèi)自由基，作者認(rèn)為動物在感染伊麗莎白菌后，其抗氧化系統(tǒng)功能會逐漸減弱，從而進(jìn)一步加劇了疾病的發(fā)生狀態(tài)（Huangetal2019）。圖1.2米爾伊麗莎白菌對黑斑蛙的系統(tǒng)感染模型（Huang等2019）Fig.1.2SystemicinfectionmodelofE.miricolaagainstP.nigromaculatus(Huangetal2019)

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆博士研究生學(xué)位論文28表2.1不同采樣地樣品采集信息Table2.1Informationofsamplefromdifferentlocations采集地Location采樣時間Time樣品量Number益陽2016.8.942寧鄉(xiāng)2016.8.1430長沙2016.8.1435株洲2016.10.326衡陽2016.9.522邵陽2016.7.2031武岡2016.7.2127圖2.1湖南黑斑蛙采樣地圖Fig.2.1Themapofsampledblack-spottedfrogsfromHunanprovince2.3方法2.3.1樣品的處理及病原檢測將樣品蛙冰園冬眠麻醉”后，用剪刀從大腦下方剪斷脊柱，取蛙的皮膚、肝臟、腎臟、腦、膽囊和肌肉等組織做病原檢測，樣品組織DNA的提取參照康為世紀(jì)DNA

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]黑斑蛙白內(nèi)障病原菌的分離鑒定及體外抑菌作用研究[D]. 吳興鎮(zhèn).西南大學(xué) 2016
[4]廣西南寧市市售蛙、蛇體內(nèi)寄生蟲調(diào)查[D]. 周慶安.廣西大學(xué) 2013



本文編號：3521254